放射性標識モノクローナル抗体を用いたマウスTヘルパーリンパ球の標識

マウス T ヘルパー、ニワトリ卵清アルブミンペプチドに特異的な T 細胞受容体 TCR を運ぶリンパ球を放射性標識するには、所望の放射性活性を持つ放射性標識モノクローナル抗体 mAb を含むチューブを採取します。

mAbは、マウスThリンパ球膜上で発現するTCRに特異的なマウスmAbを含む。キレート剤は、mAbと陽電子放出銅同位体を結合させ、安定した複合体を形成します。

放射性標識mAbを生理食塩水で希釈します。次に、希釈した放射性標識mAbをThリンパ球懸濁液を含むマルチウェルプレートに加えます。短時間インキュベートします。

培養物内では、放射性標識されたmAbはThリンパ球膜上のTCRに結合します。インキュベーション後、細胞懸濁液を新しいチューブに移します。

遠心機。結合していない放射性標識抗体を含む上清を廃棄します。Thリンパ球を培地に再懸濁し、マルチウェルプレートに移します。長時間インキュベートします。

放射性標識されたmAb-TCR結合は、原形質膜の細胞質側へのアダプタータンパク質の動員を引き起こし、そこにクラスリントリスケリオンが結合してクラスリンでコーティングされたピットを形成します。

補助タンパク質は、原形質膜から小胞をつまむのに役立ち、放射性標識されたmAb-TCR複合体の細胞質への内在化を促進します。最終的に、TCRはThリンパ球膜で再発現します。

放射性標識されたThリンパ球は、さらなる実験の準備ができています。

ニワトリの卵黄アルブミン特異的TH1細胞放射性標識を行うには、まず用量校正器を使用して、目的のT細胞特異的放射性抗体の37メガベクレルをデッドボリュームのないシリンジに引き込みます。

次に、抗体を反応カップに分注し、抽出した量からシリンジ内の残りの反応性量を測定して差し引きます。次に、カップに1ミリリットルの生理食塩水を加えて、1ミリリットルあたり37メガベクレルの溶液を生成します。

次に、0.5mlの完全培地中の6番目のOVA-TH1細胞に10倍2回を48ウェルプレートの各ウェルに加え、続いて20マイクロリットルの放射性標識抗体溶液を加えます。放射線に安全な摂氏37度および2.5%二酸化炭素の細胞培養インキュベーターで30分間後、放射性標識細胞を50ミリリットルの円錐形チューブにプールし、摂氏37度のPBS10ミリリットルで2回洗浄します。