マウスモデルにおけるマラセチア誘発性皮膚炎症と真菌負荷解析

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和見病原性真菌であるマラセチアは、マウスの表皮、つまり最も外側の皮膚層に存在します。皮膚バリアが損なわれると、表皮に浸透して炎症を引き起こす可能性があります。

マラセチア誘発性皮膚の炎症を評価するには、耳の皮膚が損傷し、表皮が破壊された麻酔

マウスを準備します。

耳の厚さを測定し、傷ついた耳にマラセチアオイル懸濁液を塗布します。オイルはマラセチアの皮膚への吸収を助けますが、傷は真菌が表皮に侵入することを可能にし、感染症を引き起こします。

表皮内では、ランゲルハンス細胞とケラチノサイトのパターン認識受容体が真菌細胞壁成分と相互作用します。相互作用すると、これらの細胞は炎症誘発性サイトカインを放出し、真皮を通って拡散して真皮血管を拡張します。これにより、感染部位での白血球浸潤と体液の蓄積が促進され、組織の浮腫や耳の腫れを引き起こします。耳の厚さの増加は炎症と相関しています。

耳を解剖し、均質化して、マラセチアを含む細胞内内容物を放出します。均質化懸濁液を増殖培地で寒天プレートに広げ、インキュベートします。これにより、個々の菌類が個別のコロニーに成長することができます。

プレート上のコロニーの数は、皮膚の炎症による真菌の負荷を反映しています。

マラセチア感染症を開始するには、麻酔をかけた6〜8週間齢の雌のC57 / Black / 6マウスのペダル反射に対する反応の欠如を確認し、動物の目に軟膏を塗布します。ノギスを使用して両耳の2つの異なる領域の厚さを測定し、耳あたりの平均厚さを計算できるようにします。次に、片方の耳の皮膚に小さなテープを貼り付けてから、毎回新しいテープを使用して耳の皮膚からテープを 5 回すばやく剥がします。

ストリッピング後、滅菌ピペットを使用して100マイクロリットルのマラセチアオリーブオイル懸濁液を各耳の背側に塗布し、200マイクロリットルの滅菌予熱した2%グルコース溶液を項部のひだに皮下注射して、代謝と水分補給をサポートします。次に、マウスをケージに戻す前に、監視しながら加熱パッドの上で30分間回復させます。

適切な実験時点で、キャリパーを使用して各マウスの耳の2つの異なる領域を測定し、耳あたりの平均厚さを計算できるようにします。感染した皮膚の真菌負荷を測定するには、オートクレーブ滅菌した直径5ミリリットルの鋼球に500マイクロリットルの滅菌0.05%NP40と蒸留水を加え、耳ごとに2ミリリットルの微量遠心チューブ1本に加え、天びんで各チューブの重量を量ります。

次に、基部で各動物から耳を採取し、組織をNP40の個々のチューブに入れます。天びん上の各チューブの重量を量り、各耳サンプルの重量を測定してから、耳組織を 25 ヘルツで 6 分間均質化します。次に、各サンプル100マイクロリットルをm-Dixon寒天プレートに分注し、摂氏30度で