細菌性病原体に対する免疫応答を研究するためのマウス皮膚創傷感染モデル

好中球で蛍光タンパク質を発現するように操作された麻酔マウスを取ります。背側を削り、円形のカットを作成します。切り取った皮膚を切除して、その下の結合組織層である筋膜を露出させます。

黄色

ブドウ球菌(病原菌)の懸濁液が入った注射器を、生物発光を生成するように遺伝子組み換えしたものを取ります。筋膜とその下にある組織の間に懸濁液を注入し、局所的な創傷感染を引き起こします。

筋膜の間質細胞上のパターン認識受容体は、細菌の病原体関連分子パターンを認識します。この結合により、炎症誘発性サイトカインと化学誘引物質の放出が誘導され、炎症が引き起こされます。

化学誘引物質は、感染部位で循環好中球を動員します。入ってくる好中球は、細菌をファゴソームに飲み込み、細胞質顆粒と融合し、抗菌ペプチドの放出を引き起こします。

酵素複合体であるNADPHオキシダーゼは、ファゴソーム膜に集合し、活性酸素種またはROSを生成します。抗菌ペプチドとROSは細菌の分解を引き起こします。

対抗反応として、細菌は好中球膜を透過性化する病原性因子を分泌し、細胞溶解を引き起こします。細菌はまた、食作用を避けるためにフィブリンの沈着のための酵素を放出します。

免疫応答は膿瘍(細菌細胞、好中球、死細胞を含むフィブリンカプセル)を引き起こします。

好中球の蛍光と細菌の生物発光を記録して、細菌と好中球の相互作用を視覚化します。

黄色ブドウ球菌接種の場合は、28ゲージのインスリン注射器に50マイクロリットルの調製した生物発光細菌接種剤を充填し、指を使って負傷した動物の真皮を横に引っ張ります。注射器を組織とほぼ平行に持ち、筋膜のピアスを示す抵抗の急激な減少が感じられるまで、注射器をゆっくりと組織に挿入します。

針を傷の中央に置き、接種剤の全量をゆっくりと送ります。接種剤が傷口の中心に漏れや分散を最小限に抑えて気泡を形成していることを確認し、注射器を動物からゆっくりと取り出します。次に、完全に回復するまで加熱と監視で動物をケージに戻します。