感染後ブドウ膜炎を研究するためのプライムマイコバクテリアブドウ膜炎のマウスモデル

全身性細菌感染後の慢性眼の炎症、またはブドウ膜炎は、感染後ブドウ膜炎と呼ばれます。

感染後ブドウ膜炎モデルを生成するには、以前に熱死滅した結核菌またはMtbで免疫された麻酔マウスを取ります。 プライミング(免疫原への事前曝露)は、循環Mtb特異的T細胞を生成します。

同じ免疫原を目の硝子体腔に注入します。マイコバクテリアは硝子体液を通して拡散し、目全体に広がります。眼の血液バリアは、免疫細胞の目への侵入を制限し、免疫特権のある器官にします。

血管周囲領域の組織常在抗原提示細胞またはAPCは、拡散した免疫原に遭遇します。免疫原を内在化すると、APCはMtb抗原を処理し、主要な組織適合性複合体(MHC)を介して表面に表示します。

活性化されたAPCはまた、血管内の内皮タイトジャンクションバリアの透過性を引き起こす炎症誘発性サイトカインを放出します。好中球やMtb特異的T細胞を含む白血球は、血管周囲腔に血管外漏出します。

Mtb 特異的 T 細胞は APC 上の抗原に結合し、炎症誘発性サイトカインを放出し、好中球に活性酸素種 (ROS) の生成を誘導し、脱顆粒を引き起こします。

放出された粒状プロテアーゼとROSは、組織実質の分解と眼の血液関門の破壊を引き起こし、炎症を悪化させます。

感染モデルは、下流の分析の準備が整いました。

注射当日、全身麻酔の深さを確認した後、0.5%テトラカイン1滴で角膜を麻酔し、2.5%フェニレフリン1滴で瞳孔を拡張します。余分な液体を軽くたたいた後、眼内炎のリスクを減らすために、目の表面と周囲の髪に5%ベタジンを1滴加えます。

2〜3分後、ベタジンを取り除き、麻酔下での乾燥と白内障の形成を防ぐために、0.3%ヒプロメロースゲルで目を覆います。次に、10マイクロリットルの注射器に抗原とフルオレセインの混合物を装填します。次に、マウスをプラットフォームの上にうつ伏せの姿勢に置き、左右のイヤーバーを使用してマウスヘッドを固定します。

右目の上側の鼻の側面が見えるように、マウスをスコープの下に配置して向きを変えます。次に、30ゲージの針を使用して、まつげを移動させ、強膜を露出させ、輪部と橈骨血管を視覚化します。

次に、滅菌された30ゲージの針を使用して、輪部の1〜2ミリメートル後方の強膜にガイド穴を開けます。次に、注射ホルダーに取り付けられた34ゲージの針を、レンズを避ける角度でガイド穴から目に挿入しますが、針先は硝子体腔に入れます。

マイクロシリンジポンプコントローラーを使用して、1マイクロリットルの結核菌抽出物を硝子体腔に慎重に注入します。逆流が一貫している場合は、注射量を 1.5 マイクロリットルに増やして、適切な用量を確実に供給します。目の緑がかった反射を視覚化して硝子体内の配置を確認し、10秒後に針を目から取り除きます。