マウスにおけるヘリコバクター感染制御のための胃内強制猶予法

ヘリコバクター・ピロリ感染モデルを確立するには、麻酔をかけた病原体のないマウスから始めます。マウスをしっかりと拘束して、手順中の動きを最小限に抑えます。

細菌懸濁液で満たされた注射器を取ります。ポリエチレンカテーテルを注射器の針に接続して、胃内強制経口検査(懸濁液を胃に直接送達する技術)を行います。

開いた口の中央にカテーテルを挿入して、口と胃をつなぐ筋肉のチューブである食道にアクセスします。カテーテルが胃に到達するまで食道をそっと導き、細菌懸濁液を酸性環境に直接送ります。

接種された細菌は、尿素をアンモニアと二酸化炭素に変換する酵素であるウレアーゼを分泌します。アンモニアは胃のpHを上昇させ、酸性度を中和し、バクテリアが生き残ることを可能にします。

これらの細菌はべん毛を利用して保護粘液層を通過し、胃上皮に到達し、そこでアドヘシンタンパク質を使用して細胞に付着します。付着すると、これらの細菌は病原性因子を放出し、上皮細胞間の緊密結合を破壊します。

この構造破壊により、細菌の侵入と深部組織へのコロニー形成が促進され、最終的には胃に制御された感染が確立されます。

15ミリリットルのポリスチレンチューブに細菌懸濁液を加え、プラスチックループを使用して、各培養物から10〜20マイクロリットルの液滴を個々のガラス顕微鏡スライドに移します。次に、100倍の倍率で位相差顕微鏡下で細菌の生存率と運動性を評価します。

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ロリ菌の接種は、細菌の大部分が細菌の形をしている場合にのみ使用してください。H. felis 接種は、主にらせん状の細菌を含み、接種を個々の使い捨て 1 ミリリットル注射器に装填する必要があります。各注射器に 23 ゲージの針を装備し、プラスチック パラフィン フィルムを使用して使い捨てポリエチレン カテーテルを各針に取り付けます。

次に、生後6〜8週間の特定の病原体フリーおよびヘリコバクターフリーマウスを首と尾の首筋で手動で拘束し、開いた顎の中央に1本のカテーテルを挿入します。カテーテルを尾側方向に食道に向かって誘導し、マウスの首を伸ばして、カテーテルの大部分または全部が見えなくなり、抵抗が感じられるまで、食道を通って気管から胃に簡単にアクセスできるようにします。次に、少なくとも1 x 10⁵の細菌を送達して、疾患の病理学における最適なコロニー形成を確保します。