感染マウス胃におけるヘリコバクター・ピロリ負荷の定量化

感染したマウスの胃におけるヘリコバクター・ピロリのコロニー形成を定量化するには、細菌の生存率をサポートするために栄養培地に懸濁された、体と前庭部を含む平らな胃組織から始めます。

均質化して胃組織を粘液層で分解し、組織から培地にヘリコバクターピロリを放出します。培地を使用して得られた胃ホモジネートの段階希釈を実行します。

乾燥馬の血寒天、HBA、プレートを複数のセグメントに分割して入手します。HBA プレートには抗生物質の混合物が添加されています。各ホモジネート希釈液をプレートの別々のセグメントに移し、均一に広げます。

乾燥後、特殊なガス混合物を入れた加湿嫌気性培養ジャー内のプレートを逆さまに配置します。インキュベート。

嫌気性培養ジャーがHBA栄養素と併せて提供する微好気性環境は、ヘリコバクター・ピロリの増殖とコロニー形成を促進する。HBA の抗生物質は、内因性胃微生物叢からの細菌種の増殖を阻害します。

特定の可算範囲内にあるHBAプレートセグメント上のヘリコバクターピロリコロニーをカウントします。

胃組織内のヘリコバクター・ピロリ負荷を計算し、組織内の細菌のコロニー形成の程度を示します。

感染後の胃内の生存可能なピロリ菌の数を数えるには、BHIに保管された胃サンプルを均質化し、得られた胃ホモジネートを新鮮な滅菌ブロスで重複して連続希釈します。

追加の抗生物質を添加した、事前に乾燥した馬の血液寒天培地、またはHBAプレートを3つまたは4つのセグメントに分割し、マイルズとミスラの技術の適応を使用して、各寒天プレートのセグメントに10〜100マイクロリットルの各胃ホモジネート希釈液を追加します。ホモジネートを滅菌プラスチックループで広げ、プレートを乾燥させます。次に、水の入ったシャーレとガスパックが入った嫌気性ガス瓶にプレートを逆さまに置き、瓶を摂氏37度で4〜7日間インキュベートします。

コロニーが観察できる場合は、10〜100個の分離されたコロニーを含むセグメントを列挙します。