マラリア-HIV同時感染のin vitro細胞培養モデルの生成

ヒト末梢血単核細胞、またはヒト免疫不全ウイルスに由来するPBMC、またはHIV感染ドナーを含むマルチウェルプレートから始めます。

PBMCには、プロウイルスDNAが組み込まれたHIV感染CD4陽性T細胞など、さまざまな免疫細胞が含まれています。

熱

帯熱マラリア原虫寄生赤血球(PfRBC)(寄生虫由来抗原を発現する)と感染していない赤血球の混合物をウェルに播種します。

インキュベーション中、PfRBCの抗原は免疫細胞の受容体と相互作用し、免疫細胞を活性化してサイトカインを放出します。

これらのサイトカインは、CD4 T 細胞の下流シグナル伝達を引き起こし、HIV プロウイルス DNA の転写と新しいウイルス RNA の合成を開始します。

ウイルスのRNAとHIVタンパク質は、芽を出すウイルス粒子を形成し、新しいCD4 T細胞に感染し、HIV感染を広げます。

進行性のHIV感染はサイトカイン分泌を妨害し、PfRBCに対する免疫応答を損ない、持続的なマラリア感染を引き起こします。

時間が経つにつれて、感染した赤血球は新しい赤血球に侵入する寄生虫を放出し、マラリア原虫を増殖させ、マラリアとHIVの同時感染細胞培養モデルを確立します。

同時感染培養物を設定するには、まず、1 x 10⁶の新たに単離されたHIV陽性およびHIV陰性のPBMCをウェルあたり100マイクロリットルのRPMI-S+に24ウェルプレートに播種します。400マイクロリットルのRPMI-S+で各ウェルの総容量を最大500マイクロリットルにします。

次に、ウェルあたり500マイクロリットルの総量を3回に分けて、3 x 10⁶の未感染赤血球または3 x 10⁶の寄生赤血球をHIV感染細胞およびHIV非感染細胞に加えます。同時感染プレートを細胞培養インキュベーターに入れます。

次に、適切な実験期間の後、細胞をペレット化し、各ウェルから700マイクロリットルの培養上清を収集します。上清を遠心分離して破片を取り除きます。次に、必要に応じてサンプルを分注します。チューブにラベルを付け、後で分析するために摂氏マイナス20度以下で凍結します。