同種骨髄移植および脾細胞移植によるマウスモデルにおける移植片対宿主病の誘導

宿主免疫系を抑制するために事前に照射された麻酔をかけたレシピエントマウスから始めます。

遺伝的に異なるドナーマウスから造血幹細胞を取得し、同種幹細胞移植を模倣します。

磁気ビーズを使用してドナーT細胞を除去します。

このT細胞枯渇懸濁液をレシピエントマウスの眼球後腔に注入します。

移植された細胞は血流に入り、骨髄血管に移動し、接着分子を使用してニッチに入り、造血を開始します。

同種ドナーマウスからの脾臓Tリンパ球をレシピエントの眼球後腔に注入して、免疫交差反応性を誘導します。

これらの同種反応性T細胞は、さまざまな組織に移動します。

T細胞表面受容体はレシピエント細胞抗原に結合し、それらを外来物として認識します。

これにより、T リンパ球内で一連のシグナル伝達イベントが引き起こされ、その活性化につながります。

活性化されたT細胞は、宿主組織に集合的に損傷を与える追加の免疫細胞の動員を特徴とする炎症カスケードを引き起こし、移植片対宿主病の発症につながります。

レシピエントBALB / cマウスの全身照射の1日後に、CD45.1 / Ly5.1 B6を配置します。SJLドナーマウスを清潔な作業シースの上に腹臥位に置き、セムケン鉗子の13センチメートルの湾曲した鋸歯状の先端を1つ使用して、片方のアキレス腱の毛皮を持ち上げます。

先端がまっすぐな8.5センチの細いハサミを使用して、鉗子と片方のかかとの間の皮膚を切開し、切開部を頭蓋側に伸ばして、後肢から皮膚と毛皮を取り除きやすくします。後肢から皮膚を取り除いたら、股関節、足首関節、膝関節をそれぞれ切り取ります。

すべての後肢の太ももとすねを、氷上のPBSで満たされた単一の92ミリメートルのペトリ皿に保管し、各骨からできるだけ多くの筋肉を慎重に取り除き、洗浄された各大腿骨と脛骨を湿った氷上の滅菌RPMI 1640培地の50ミリリットルのチューブに移します。

骨髄を分離するには、一度に1つの骨を、新鮮なRPMI 1640培地で満たされた新しい92ミリメートルのペトリ皿に移し、メスを使用して各骨の端を切り取ります。次に、26 ゲージの針を備えた 1 ミリリットルの注射器を使用して、一度に 1 ミリリットルの新鮮な培地で骨を 5 ミリリットルの培地を含む 50 ミリリットルの収集チューブに洗い流します。

すべての骨が洗い流されたら、もろい骨髄片を数回上下にそっとピペットで移動させ、単一細胞懸濁液を生成します。40マイクロメートルのメッシュスクリーンセルストレーナーを介して細胞を新しい50ミリリットルの収集チューブにろ過する前に、遠心分離によって細胞をペレット化し、細胞を5ミリリットルの塩化アンモニウムカリウム溶解バッファーに再懸濁し、室温で3分間インキュベートします。インキュベーションの最後に、10ミリリットルのPBSで反応