実験化合物を投与するための成体ゼブラフィッシュの経口挿管

まず

、滅菌口腔挿管装置にナノ構造のサイトカイン封入体(実験用ナノ粒子)の懸濁液をロードします。

空腹時に麻酔をかけたゼブラフィッシュを湿ったプラスチックトレイに置きます。

魚をしっかりと持ち、口腔挿管装置に取り付けられたピペットチップを使用してそっと口を開けます。

魚の口から食道に針を慎重に挿入します。

ピペットチップが鰓を通過し、わずかな抵抗に遭遇したら、それ以上の挿入を避けてください。

ナノ粒子を魚にそっと注入します。

注射すると、これらのサイトカインナノ粒子はゼブラフィッシュの消化管の内側を覆う上皮細胞と直接接触します。

これらの細胞はエンドサイトーシスによってナノ粒子を内在化します。

上皮細胞内では、小胞は細胞内処理を受けてサイトカインナノ粒子を放出します。

これらのサイトカインナノ粒子は、下にある結合組織に出て、常在免疫細胞と相互作用し、細胞内シグナル伝達イベントを引き起こし、サイトカイン駆動の免疫応答を引き起こします。

約1センチメートルの細いシリコンチューブを31ゲージのルアーロック針に置きます。滅菌済みの10マイクロリットルのフィルターピペットチップを切断し、細かい端を取り、シースとしてシリコンチューブの上に置きます。

まず、針装置を 100 マイクロリットルのルアーロック注射器に取り付けます。まず、実験の一晩前に魚を実験用水槽に移します。調製したナノ粒子溶液をよく渦にし、所望の量の懸濁液を引き上げます。魚を安全に麻酔した後、網を使用して魚を濡れたプラスチックトレイにすばやく移します。

動物を針に向くように水平に向けます。片手で魚を注意深く支え、保護された針で口を開き、口の開口部から約1センチメートルまで食道に針をそっと挿入します。

針がどこまで行くべきかを見るのは難しく、これは練習の問題です。針が止まるのを感じ、針を操作することで、デバイスをもう少し挿入するための正しい角度を見つけることができます。

ナノ粒子懸濁液を魚にゆっくりと注入し、懸濁液が鰓や口から外側に流れないようにします。この後、針をそっと取り除き、魚を回収タンクに入れます。魚が回復する間、魚に異常がないか監視してください。魚が回収されたら、実験水槽の1つに戻します。