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腹部を露出させた外科的に介入されたラットから始めます。
右腎に垂直に横たわり、腸間膜動脈の前方と平行に配置された上腸間膜リンパ管を見つけます。
まっすぐな鉗子を腎周囲脂肪床に通します。
リンパカニューレを腎周囲脂肪床に通し、一方の端をリンパ管に隣接して配置し、もう一方の端を動物の体の外に突き出させます。
次に、リンパ管に小さな切開を行います。
カニューレに抗凝固液を満たし、リンパ管に挿入します。
管内のリンパ液には、血栓形成につながる一連のイベントを引き起こす凝固因子を含むいくつかの生体分子が含まれています。
しかし、抗凝固剤は凝固因子に結合し、その活性を阻害します。
これにより、凝固していないリンパ液がカニューレを自由に流れるようになります。
入り口の穴に動物用接着剤を塗布して、カニューレを所定の位置に固定します。
手術の前日に、カニューレを適切な長さに切断し、滅菌手術用ブレードを使用して各チューブの先端に面取りを作ります。次に、十二指腸内カニューレを準備するには、カニューレをループ状に戻し、カニューレを加熱してチューブにアンカーポイントを作成します。
手術当日、麻酔した成体ラットの腹部と首の右側、鎖骨の左側から毛皮を剃り、その後、3回連続したポビドンヨード溶液と70%エタノールスクラブで手術部位を無菌洗浄します。
腸間膜リンパ管をカニューレ挿入するには、動物を右側を上に向けて置き、滅菌メスの刃を使用して、剣状突起から右脇腹まで伸びるまっすぐな4センチメートルの切開で腹筋壁の最上層を開きます。
小腸を左腹壁の下に引っ込め、生理食塩水で飽和させた滅菌ガーゼを2〜3枚使用して所定の位置に保持します。次に、腸間膜リンパ管の視覚化を助けるために、右腎臓の高さで動物の背中に水平に配置された10ミリリットルのプラスチック注射器の上にラットをブリッジします。
直径約0.5〜1ミリメートルで、右腎に垂直で、すぐに吻側に暗赤色の脈動腸間膜動脈と平行な上腸間膜リンパ管を見つけます。絶食していないラットでは、ここに示すように、上腸間膜リンパ管は白く、不透明で、絶食ラットよりも視覚化しやすいことに注意してください。
次に、上腸間膜リンパ管に平行な右腎臓の下縁にある腎周囲脂肪床に一対のまっすぐな鉗子を通し、大静脈のすぐ下の結合組織層を通します。次に、鉗子の先端を使用して、リンパカニューレを腎周囲脂肪床を通して引っ張り、一方の端は腸間膜リンパ管のすぐ隣にあり、もう一方の端は右腎臓のレベルで動物から外側に外側に置かれます。
次に、手術用顕微鏡と宝石商の鉗子を使用して、下端から始めてリンパ管を損傷しないように注意しながら、結合組織と脂肪組織の上層から腸間膜リンパ管を分離します。管が隔離されたら、先端の細い鉗子の先端を使用してリンパ管に小さな穴を開けます。リンパカニューレが抗凝固液で完全に満たされ、エアギャップがないことを確認した後、小さな鉗子を使用して、穿刺を介して腸間膜リンパ管内の約2〜4ミリメートル
のリンパカニューレを挿入します。カニューレ挿入が成功すると、カニューレの自由収集端から腸リンパ液の緩やかな流れが観察されます。これが発生した場合は、リンパ管への入り口の穴にシアノアクリレート接着剤を少量垂らしてカニューレを固定し、余分な接着剤で血管を塞がないように注意します。