JoVE 実験百科事典
免疫学
0 回視聴 • 2:36 分 • July 8th, 2025
まず、免疫不全マウスを準備します。
針先が曲がったアセンブリを使用して、肺がん細胞懸濁液を胸腔に注入します。
がん細胞は、少量の胸水を含む胸膜に到達します。
これらのがん細胞の受容体は、胸膜の内側を覆う中皮細胞によって産生される特定の ECM 多糖類に結合し、胸膜表面への細胞の付着を促進します。
がん細胞はこれらの多糖類を処理し、がん細胞の表面への移動を増加させます。また、タンパク質分解酵素やオートクリン成長因子も放出します。
タンパク質分解酵素はECMタンパク質を分解し、がん細胞の浸潤を促進します。
機能的な免疫系の欠如とオートクリン成長因子の存在により、がん細胞の無制限の増殖が可能になり、腫瘍結節が形成されます。
時間が経つにつれて、腫瘍結節は胸膜腔内で成長して拡散し、正常な生理的体液バランスを破壊します。
これにより、胸水として知られる状態が胸膜腔内に蓄積します。
マウス普及モデルをセットアップするには、発泡スチロールを使用してストッパーを作成し、70%エタノールで消毒します。針をストッパーに取り付け、先端がストッパーから5ミリメートル伸びます。30ゲージの針の先端を清潔な鉗子で、または70%エタノールで洗浄した硬い物体に当てて曲げ、100マイクロリットルのPBSに1 x 106の標的腫瘍細胞をシリンジに充填します。
麻酔をかけた19〜21グラムの8〜12週齢の雌ホモ接合体無胸腺ヌードマウスにおけるペダル反射に対する反応の欠如を確認します。肋間腔から胸に針を挿入し、肋骨に接触しないように針を上下に動かします。先端が肋間腔を通過したら、注射器がマウスに押し付けられるように注射器を配置し、標的細胞の全容積を排出します。注射後、マウスを2〜3回転がして細胞を胸腔全体に広げ、完全に回復するまでモニタリングしながらマウスをケージに戻します。
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