ラットに慢性実験的自己免疫性ドライアイを誘発する技術

涙腺由来の自己抗原および外来抗原を含む抗原アジュバントエマルジョンで以前に免疫されたラットを取ります。

エマルジョンを再注入し、百日咳毒素を腹腔内に注入し、T細胞の活性化を最大限に高めます。

活性化された細胞は、循環エフェクターメモリーT細胞、TEM、および組織常在メモリーT細胞(TRM)に分化します。TRM の一部は眼表面組織に存在します。

定義された間隔の後、抗原を円孔結膜下および涙腺に注入し、局所的な炎症を誘発します。

結膜下抗原提示細胞 (APC) は TRM に抗原を提示し、サイトカイン放出を引き起こします。

サイトカインは結膜上皮細胞にケモカインを放出させ、TEMを動員します。

APC は浸潤した TEM を再活性化し、炎症誘発性サイトカイン放出を引き起こします。

サイトカインは、ムチン産生結膜杯細胞の死を引き起こし、ムチンレベルを低下させ、涙液層の不安定性を引き起こします。

サイトカインは涙腺細胞死を誘導し、涙液の生成を減少させ、角膜上皮細胞を刺激してマトリックスメタロプロテイナーゼを産生し、角膜に損傷を与えます。

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ライアイ導入の成功を示す臨床的特徴についてラットを評価します。

0日目に、1ミリグラムの涙腺抽出物と200マイクログラムのオボアルブミンを含む200マイクロリットルのエマルジョンを分配し、フロイントアジュバントを1ミリリットルのルアーロック注射器に完成させ、注射器に27ゲージの針を装備します。

麻酔を使用せずに、ラットの尾の付け根にエマルジョンを皮下注射します。次に、14日目に同様の方法で、同じ抗原と不完全なフロイントアジュバントを200マイクロリットル注射します。同じ日に、100マイクロリットルのPBSに300ナノグラムの百日咳毒素を腹腔内注射します。

48日目に、必要な量のオボアルブミンを秤量し、PBSに溶解し、オボアルブミンをこのビデオの前半で調製した解凍した涙腺抽出物と組み合わせて、オボアルブミン1ミリリットルあたり1ミリグラム、涙腺抽出物1ミリリットルを含む抗原溶液を作ります。

ラットを麻酔した後、5マイクロリットルの抗原を眼の円掌下結膜に注射し、次に20マイクロリットルの抗原を涙腺に注射します。