角膜損傷を調べるための自己免疫性ドライアイラットモデルにおけるフルオレセイン染色

自己免疫性ドライアイ疾患の症状を示す麻酔ラットから始めます。

ラットの角膜に適量のフルオレセイン色素を塗布します。

ラットのまぶたを閉じたり開いたりして、フルオレセインが角膜全体に均一に広がるようにします。

染料が落ち着いて角膜に付着するのを待ちます。

自己免疫性ドライアイ疾患では、免疫細胞が誤って涙腺を標的にして攻撃し、涙液の生成を減少させます。

これは角膜上皮の乾燥と、下にあるボーマン膜(間質の前方の無細胞ゾーン)の損傷につながります。

フルオレセイン分子は、損傷した角膜バリアを透過して、下にあるコラーゲンが豊富な間質層に到達します。

ここで、フルオレセイン分子がコラーゲンに結合し、コラーゲン線維が染色されます。

適切なイメージング技術を使用して、染色された角膜の画像を取得します。

緑色の蛍光スポットの数、面積、強度を分析して、角膜の損傷の程度を測定します。

フルオレセインスキャンを使用して、2マイクロリットルの0.2%フルオレセインをラット角膜に添加することにより、角膜損傷を測定します。手袋をはめた指で、ラットのまぶたを受動的に開閉し、フルオレセイン色素を目の表面に広げます。

1分後、3ミリリットルの注射器を使用して1ミリリットルの生理食塩水を抽出します。次に、注射器を角膜の約2〜3ミリメートル前方に置き、生理食塩水を目にそっと塗布します。背景灯を消した状態で、眼画像顕微鏡のコバルトブルーフィルターで画像を取得します。