マウス脳への抗体の対流増強送達

蓋正中線切開を有する麻酔マウスを定位フレームに固定します。

蓋骨の基準点であるブレグマを検出し、注入位置を決定します。

その場所にバリ穴を開け、脳を覆う硬膜の損傷を防ぎます。

抗体をロードしたステップカテーテルを取り、定位ロボットに取り付け、輸液ポンプに接続します。

カテーテルは、金属針から突き出た溶融シリカ毛細管で構成され、融合点に段差状の外径を作成します。

カテーテルを脳実質に挿入します。輸液ポンプを始動してカテーテルの開口部に圧力勾配を作り、制御された速度で抗体を送達します (対流増強送達として知られる技術)。

段付き直径が組織を圧縮し、シールを作成します。

このシールは体液の逆流を防ぎ、組織損傷のリスクを低減しながら、大量の抗体の分布を可能にします。

マウス線条体への抗体注入は、麻酔マウスの皮膚つまみに反応がないことを確認し、毛髪トリマーで頭を剃ります。ヨウ素溶液に浸した綿棒で皮膚を消毒します。

メスを使用して、頭蓋正中線に沿って10ミリメートルの皮膚切開を行い、目の高さで仕上げます。ノーズクランプとイヤーバーを使用してマウスを定位フレームに固定し、頭蓋骨の表面が水平でしっかりと固定されるように注意します。

注射器を定位ロボットに置き、ドリルビットを基準点のカテーテルの先端と同期させます。鉗子を使用して皮膚を引っ込め、頭蓋骨表面の前胆を局在させます。ドリルビットの先端を使用してソフトウェアでブレグマを参照し、ドリルをブレグマの位置から正面1ミリメートル、横方向2ミリメートルに移動します。

硬膜を傷つけないように注意しながらバリ穴を開け、バリ穴の上で注射器を動かします。シリンジから0.5〜1マイクロリットルを分注して、カテーテルに気泡が残らないようにします。実証されているように、対流増強送達を開始し、注射スポットからの液体逆流の痕跡がないか頭蓋骨表面を観察します。

送達とカテーテルの抜去の最後に、注入ポンプを毎分 0.2 マイクロリットルで始動し、注射中のカテーテルの詰まりの証拠を確認します。目詰まりが発生しなかった場合は、カテーテルの先端から注射混合物の液滴がすぐに観察されるはずです。