チャイニーズハムスター卵巣細胞が産生するモノクローナル抗体を精製する技術

抗体結合細菌タンパク質である固定化プロテインAを含む多孔質ガラス樹脂を含むFPLCカラムを取ります。中性pHバッファーでカラムを平衡化します。

チャイニーズハムスターの卵巣細胞から採取した、モノクローナル抗体と汚染タンパク質とDNAを含む細胞培養液を加えます。

プロテインAは抗体のFc領域に結合し、それらを固定化します。

一部の汚染物質は樹脂に非特異的に付着し、残りは流れます。

クロマトグラムでは、サンプルローディング中のUV吸光度の増加は、フロースルー中のタンパク質濃度が高いことを示しています。

平衡バッファーで洗浄して、吸光度の低下によって示される結合していない汚染物質を除去します。

高塩バッファーでフラッシュし、非特異的相互作用を破壊し、小さな不純物ピークで示される汚染物質を除去します。

低pH溶出バッファーを添加してプロテインA抗体の相互作用を阻害し、対応するピークを追跡して収集した抗体を溶出します。

採取した抗体のpHを中和し、分解を防ぎます。

まず、

精製システムに取り付けられたソフトウェアを開き、精製された抗体溶出液を収集するために15ミリリットルのコニカルチューブを配置し、高塩洗浄中のフロースルーをフラクションコレクターに収集するために50ミリリットルのコニカルチューブを配置します。

次に、0.22マイクロメートルの細孔ろ過された回収細胞培養液を、キャップ付きのノズル付きの空の12ミリリットルシリンジに加えます。キャップを取り外した後、シリンジノズルを精製システムの手動注入ポートに挿入します。シリンジをひねって所定の位置に締め、サンプルの全量が注入され、付属の10ミリリットルの大容量サンプルループに表示されるまでプランジャーを押します。

保存したメソッドを選択し、装置ソフトウェアからプロンプトが表示されたら[実行]をクリックします。すべての抗体が溶出したら、精製したタンパク質を1モルトリス塩基ですぐにpH約5.5に中和します。