二重特異性抗体誘導性T細胞の腫瘍への輸送を追跡するためのin vivo技術

腫瘍関連抗原またはTAAを過剰発現する皮下腫瘍異種移植片を持つ麻酔をかけた免疫不全マウスを取ります。

ルシフェラーゼ酵素を発現するエフェクターT細胞を眼窩後部に注入する。

エ

フェクターT細胞の生存をサポートするサイトカインであるインターロイキン2を皮下投与します。

T細胞と腫瘍細胞の結合部位を含むように操作された二重特異性抗体を眼窩後部に注入します。マウスが回復するまで待ちます。

抗体とT細胞は循環を介して腫瘍に到達します。

抗体は、T細胞のCD3および腫瘍細胞のTAAに結合し、エフェクターT細胞に毒素を放出させ、腫瘍細胞のアポトーシスを開始し、より多くのT細胞を腫瘍に動員するケモカインを放出させます。

マウスを麻酔し、ルシフェラーゼ基質を眼窩後に注射し、in vivoイメージングに進みます。

T細胞内のルシフェラーゼは基質を酸化し、生物発光を放出します。

時間の経過に伴う生物発光を観察します。シグナルの大きさは、腫瘍内のT細胞浸潤の程度と相関します。

26ゲージの針を使用してマウスを麻酔した後、2,000万個のT細胞を100マイクロリットルの培地に眼窩後部に注入します。1,000単位の組換えIL-2を皮下投与して、in vivoでのT細胞生存をサポートします。次に、二重特異性抗体を眼窩後または腹腔内に投与します。

in vivoイメージングの場合、麻酔をかけたマウスに26ゲージの針で眼窩後注射により、100マイクロリットルの3ミリグラムのD-ルシフェリンを投与します。画像をキャプチャするには、異種移植片を支える側面がカメラに向かって上を向くように、イメージャーの遮光チャンバーにマウスを置きます。取得コントロールパネルを使用して、発光、写真、およびオーバーレイを選択します。露光時間を自動に、ビニングを中、Fストップを1に設定して、画像を取得します。

最初の画像の後、最初の画像に対して自動的に計算された時間と一致するように露光時間を設定し、後続の画像を直接比較できるようにします。マウスを仰臥位にして別の一連の画像を撮影し、肺内のT細胞の存在を評価します。