トランスフェクションされた哺乳類細胞のバッチ過剰増殖培養による抗体産生

細胞凝集

を防ぐために非イオン性界面活性剤を添加した無血清培地中に安定してトランスフェクトされた哺乳類細胞を含むフラスコから始めます。

これらの細胞は、治療用抗体産生のための統合された重鎖および軽鎖遺伝子を含む改変ゲノムを持っています。

細胞代謝に不可欠なペプチドとアミノ酸の栄養豊富な供給源であるトリプトンを紹介します。

細胞はこれらのアミノ酸とペプチドを利用して増殖し、その結果、より高い抗体収量をサポートする異常増殖が起こります。

細胞内の遺伝子の発現は、重鎖および軽鎖ポリペプチドの産生を促進します。

小胞体では、これらの鎖は鎖間ジスルフィド結合を介して折り畳まれて二量体化し、治療用抗体を形成します。

ゴルジ体では、抗体は翻訳後修飾を受けます。次に、それらは小胞にパッケージ化され、培地に放出されます。

抗体産生を増やすために、細胞を長期間インキュベートします。

細胞の生存率が低下し始めたら、上清を採取します。

治療用抗体を含む上清をろ過し、後で使用するために低温で保存します。

2つのフラスコに100ミリリットルの無血清培地に100ミリリットルの無血清培地に1ミリリットルあたり² x 10 5細胞の細胞を播種します。細胞を摂氏37度、二酸化炭素5%で毎分120回転で24時間インキュベートします。栄養補給培養物に、最終濃度0.5%のトリプトンを加えます。次に、無血清培地を使用して、追加されていない培養物の量を均等にします。細胞をさらに7日間インキュベートします。

培養の8日目以降は、血球計算盤を使用して毎日細胞をカウントし、細胞の生存率を監視します。細胞生存率が80%未満に達したら、3,000倍gで15分間遠心分離して培養物を回収します。次に、0.22マイクロメートルのフィルターを通して上清をろ過滅菌します。上清を短期的には摂氏4度で保存するか、長期的には摂氏で凍結します。