0 閲覧数 • 3:31 分 • July 8th, 2025
特異的抗体をプリントした抗体マイクロアレイチップから始めます。
各スポットには、特定のシアノバクテリア株に対する独自の抗体が含まれています。
チップをブロッキングバッファーで処理して、非特異的な相互作用を最小限に抑えます。
複数のウェルを備えたハイブリダイゼーションカセットにチップを組み立てます。
環境サンプルをウェルに導入し、最適化された条件下でインキュベートします。
サンプルには、さまざまなシアノバクテリア株を含むさまざまな細菌が含まれており、印刷されたチップ上の特定の抗体と相互作用します。チップを洗浄して、結合していない細菌を取り除きます。
それぞれのシアノバクテリア細胞上の特定の抗原と相互作用する蛍光色素標識抗シアノバクテリア株抗体を含む抗体混合物を追加します。結合していない抗体を除去します。
カセットを分解し、チップを洗浄して乾燥させてからスキャンします。
特定のスポットでの蛍光は、サンプル中に特定のシアノバクテリア株が存在することを示します。
プロバイダーの指示に従って、スライドを3×8ウェルのマイクロアレイハイブリダイゼーションカセットにセットアップします。または、抗体印刷パターンを変更した後、ここに示すようなカスタムメイドのカセットをセットアップするか、単にカバースライドを使用してセットアップします。
スライドとカセットの組み立てに続いて、各サンプル抽出物を最大50マイクロリットルまでピペットでピペットで抽出するか、抽出インキュベーションバッファーでカセットの各ウェルに希釈します。または、サンプルを他のインキュベーションデバイスにロードするか、単にカバースライドを使用します。
ブランクコントロールとして、50マイクロリットルのTBST-RRバッファーをカセットの少なくとも2つの別々のウェルにピペットで入れます。サンプルを周囲温度で1時間インキュベートし、15分ごとにピペッティングして混合するか、摂氏4度で12時間インキュベートします。
マイクロアレイを洗浄するには、カセットを下に置き、清潔な吸収紙に慎重に軽くたたきます。次に、150マイクロリットルの抽出インキュベーションバッファーをそれぞれに加えてウェルを洗浄し、以前と同様に吸収紙を軽くたたいてバッファーを取り除きます。さらに3回洗濯を繰り返します。
各ウェルに、17の抗シアノバクテリア株抗体を含む蛍光抗体混合物を50マイクロリットル加えます。サンプルを周囲温度で1時間、または摂氏4度で12時間インキュベートします。
マイクロアレイを洗浄するには、カセットを慎重に下に置き、清潔な吸収紙に軽くたたきます。次に、150マイクロリットルの抽出インキュベーションバッファーを加えてから、ペーパータオルを軽くたたいて取り除きます。洗浄を3回繰り返します。次に、カセットを分解し、スライドを 0.1x PBS 溶液に浸してすばやくすすぎます。以前と同じようにすばやく遠心分離してスライドを乾燥させます。
蛍光スキャナーを使用して、スライドをスキャンして、遠赤色蛍光色素の最大発光ピークで蛍光を検出します。ゲイン値を変更して、異なるスキャンパラメータでマイクロアレイの画像を複数撮影します。
本研究では、抗体マイクロアレイチップを用いて特定のシアノバクテリア株を検出する方法について概説します。このプロセスでは、環境サンプルを抗体で処理することで、さまざまなシアノバクテリアの相互作用を同定および定量化します。
抗体マイクロアレイチップを用いることで、複雑な環境サンプル中のシアノバクテリア株のマルチプレックス検出が可能となり、ハイスループットな生物学的特性評価が促進されます。この機能は、標的の検証およびメカニズムのリスク低減に不可欠な、定量的かつ株特異的なデータを提供することで、初期探索ワークフローを強化します。本アプローチは、微生物プロファイリングやアッセイ開発のための堅牢で拡張可能なツールを求めるバイオ医薬品開発チームにとって有用です。
この抗体マイクロアレイ技術は、創薬から前臨床に至る一連の流れに適合し、早期の微生物プロファイリングを可能にすることで、リード化合物の同定に関する意思決定を支援します。
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最終更新:29 8月 2026