抗体マイクロアレイチップを用いたシアノバクテリア株検出技術

0 閲覧数3:31 • July 8th, 2025

特異的抗体をプリントした抗体マイクロアレイチップから始めます。

各スポットには、特定のシアノバクテリア株に対する独自の抗体が含まれています。

チップをブロッキングバッファーで処理して、非特異的な相互作用を最小限に抑えます。

複数のウェルを備えたハイブリダイゼーションカセットにチップを組み立てます。

環境サンプルをウェルに導入し、最適化された条件下でインキュベートします。

サンプルには、さまざまなシアノバクテリア株を含むさまざまな細菌が含まれており、印刷されたチップ上の特定の抗体と相互作用します。チップを洗浄して、結合していない細菌を取り除きます。

それぞれのシアノバクテリア細胞上の特定の抗原と相互作用する蛍光色素標識抗シアノバクテリア株抗体を含む抗体混合物を追加します。結合していない抗体を除去します。

カセットを分解し、チップを洗浄して乾燥させてからスキャンします。

特定のスポットでの蛍光は、サンプル中に特定のシアノバクテリア株が存在することを示します。

プロバイダーの指示に従って、スライドを3×8ウェルのマイクロアレイハイブリダイゼーションカセットにセットアップします。または、抗体印刷パターンを変更した後、ここに示すようなカスタムメイドのカセットをセットアップするか、単にカバースライドを使用してセットアップします。

スライドとカセットの組み立てに続いて、各サンプル抽出物を最大50マイクロリットルまでピペットでピペットで抽出するか、抽出インキュベーションバッファーでカセットの各ウェルに希釈します。または、サンプルを他のインキュベーションデバイスにロードするか、単にカバースライドを使用します。

ブランクコントロールとして、50マイクロリットルのTBST-RRバッファーをカセットの少なくとも2つの別々のウェルにピペットで入れます。サンプルを周囲温度で1時間インキュベートし、15分ごとにピペッティングして混合するか、摂氏4度で12時間インキュベートします。

マイクロアレイを洗浄するには、カセットを下に置き、清潔な吸収紙に慎重に軽くたたきます。次に、150マイクロリットルの抽出インキュベーションバッファーをそれぞれに加えてウェルを洗浄し、以前と同様に吸収紙を軽くたたいてバッファーを取り除きます。さらに3回洗濯を繰り返します。

各ウェルに、17の抗シアノバクテリア株抗体を含む蛍光抗体混合物を50マイクロリットル加えます。サンプルを周囲温度で1時間、または摂氏4度で12時間インキュベートします。

マイクロアレイを洗浄するには、カセットを慎重に下に置き、清潔な吸収紙に軽くたたきます。次に、150マイクロリットルの抽出インキュベーションバッファーを加えてから、ペーパータオルを軽くたたいて取り除きます。洗浄を3回繰り返します。次に、カセットを分解し、スライドを 0.1x PBS 溶液に浸してすばやくすすぎます。以前と同じようにすばやく遠心分離してスライドを乾燥させます。

蛍光スキャナーを使用して、スライドをスキャンして、遠赤色蛍光色素の最大発光ピークで蛍光を検出します。ゲイン値を変更して、異なるスキャンパラメータでマイクロアレイの画像を複数撮影します。

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最終更新:29 8月 2026