Aβペプチド特異的抗体とAβオリゴマーのラット海馬への制御注入

海馬に両側に埋め込まれた2つのガイドカニューレで目覚めているラットを取ります。

カニューレは、それぞれアミロイドベータ抗体またはAβ特異的抗体および対照抗体を含む皮下埋め込み浸透圧ポンプに接続されています。

ポンプ内の抗体濃度が高いと、周囲の組織から外側の半透膜を介して水の拡散が誘導され、浸透圧層が拡張されます。

この拡張により抗体リザーバーが圧縮され、制御された抗体放出が促進されます。

輸液ポンプに接続された滅菌水で満たされたカテーテルに2つの内部カニューレを取り付けます。

カニューレを水で満たします。

次に、少量の空気を吸引して気泡を作ります。

次に、カニューレを神経毒性Aβオリゴマー、Aβペプチドの可溶性凝集体で満たします。

内部カニューレをガイドカニューレに挿入します。ポンプを始動してオリゴマーの制御された送達を行い、気泡を使用して逆流を防ぎ、注入速度を追跡します。

必要な期間、オリゴマー注射を繰り返し投与します。

このモデルは、Aβオリゴマーと抗体の相互作用を研究する準備ができています。

設置の 1 日前に、製造元の指示に従って浸透圧ポンプに 6E10 抗体またはコントロール IgG1 抗体を充填してください。ポンプを滅菌蒸留水に入れ、一晩摂氏37度に保ち、ポンプを作動させます。

ラットを3%イソフルランで麻酔し、肩甲骨の間を剃ったら、2%グルコン酸クロルヘキシジンと2%イソプロピルアルコールの溶液で皮膚を消毒します。肩甲骨の間にメスで2センチの切開をした後、ガイドカニューレに接続されたPE-50カテーテルを見つけます。

次に、歯科用セメントを含むPE-50カテーテルの端をメスで切断します。浸透圧ポンプを PE-50 カテーテルに接続し、ポンプとカテーテルの接合部に歯科用セメントを追加して接続を固定します。最後に、4/0縫合糸で皮膚をしっかりと縫い合わせます。動物を温かいヒートパッドの上のケージに戻し、イソフルラン麻酔から目覚めるのを監視します。

以前に報告されたようにアミロイド-ベータオリゴマー溶液を調製した後、注入する前に溶液を室温で1時間動的かつ自発的に凝集させます。次に、各注射器に 5 マイクロリットルの滅菌蒸留水を入れます。

次に、PE-50カテーテルを2本、メスで長さ約60センチに切断します。21ゲージの針を取り付けた2つの1ミリリットルの注射器を使用して、両方のカテーテルに滅菌蒸留水を満たします。1 ミリリットルの注射器を所定の位置に残したまま、各カテーテルの一方の端で自由端をハミルトン注射器に接続します。1ミリリットルの注射器を取り外し、カテーテルに気泡がないことを確認します。

PE-50カテーテルの端に内部カニューレを挿入します。ハミルトン注射器を使用して、各内部カニューレを最大1マイクロリットルまで満たし、ピストンを2マイクロリ