0 閲覧数 • 2:51 分 • July 8th, 2025
三次元多孔質構造を持つポリスチレン足場を保持する多孔質インサートを含むマルチウェルプレートから始めます。
エタノールを加えて足場を再水和し、培地で洗浄します。
細胞外マトリックスタンパク質、ラミニンを含む培地を導入します。ラミニンが足場をコーティングできるようにインキュベートします。
成長因子を含む神経培地にヒト神経幹細胞を、ラミニンでコーティングされた足場に播種します。
幹細胞が多孔質足場に移動できるようにインキュベートし、そこでラミニンが足場への細胞の付着を促進します。
細胞は成長因子を利用し、この足場内で増殖します。
成長因子を含まない神経培地を追加し、使用済み培地を定期的に交換して、細胞の生存率を維持します。
成長因子がないため、幹細胞の神経前駆細胞への分化が刺激されます。
時間が経つにつれて、これらの前駆細胞の神経突起は伸長し、多方向の細胞増殖を可能にし、三次元培養を形成します。
Alvetex 12ウェルプレートの各ウェルに、灌漑用の水を使用して調製した2ミリリットルの70%エタノールを加えて、足場を再水和します。各ウェルの壁に70%エタノールを分配して、足場に触れないようにしてください。70%エタノールを注意深く吸引し、すぐにDMEM F12のウェルあたり2ミリリットルで足場を1分間洗浄します。
洗浄手順を2回繰り返します。最終洗浄後、DMEM F12を慎重に吸引します。DMEM F12中のラミニン2ミリリットルを各ウェルに添加して、足場をコーティングします。プレートを摂氏37度で、5%二酸化炭素加湿インキュベーターで最低2時間インキュベートします。
次に、温かいDMEM F12でプレートを洗浄します。成長因子を含む150マイクロリットルのRMM培地の容量に約500,000個のヒト神経幹細胞またはHNSCを各足場に播種します。プレートを3時間インキュベートして、細胞が足場に落ち着くようにします。
3時間後、足場から細胞が外れないように注意しながら、各ウェルに3.5ミリリットルのRMMを追加します。プレートを7日または21日間インキュベートします。最初の給餌である1日後に培地を交換し、最初の給餌から2〜3日後に再び培地を交換します。