ハンギングドロップカルチャー技術を用いたニューロンボールの開発

マウス胚性ニューロン前駆細胞の神経基底培地中の単一細胞懸濁液から始めます。

培地には、細胞の生存率を維持するために必須の栄養素が含まれています。

この細胞懸濁液を非粘着性培養皿の蓋に少量滴垂らし、間隔をあけて

分配します。

蓋を裏返すと、垂れ下がった滴が形成されます。

緩衝液の入った皿の上に蓋を置き、培地の蒸発を防ぎ、インキュベートする湿気の多い環境を確立します。

吊り下げられた液滴内では、液体の表面張力が液滴の形状を維持します。

この形状の閉じ込めにより、細胞は広がることなく限られたスペースに制限されます。

さらに、液滴内の重力により、細胞は下部領域に向けられます。

ニューロンの前駆細胞が密接に接触すると、自発的に凝集してニューロンボールとして知られる三次元構造を形成します。

ニューロンボールを調製するには、NGB培地を使用して、この細胞懸濁液の細胞密度を1ミリリットルあたり100万細胞に調整します。培養皿の底部分に7ミリリットルのPBSを加えます。皮質ニューロンを、10センチメートルの培養皿の上蓋の内側に、1滴あたり10,000個の細胞を含む10マイクロリットルの吊り下げ滴として培養します。ニューロンボールの形成を可能にするために、加湿条件下で摂氏37度、5%CO₂のインキュベーターに皿を3日間保管します。