プラスチックマイクロ流体チップを用いた分別初代マウスニューロン培養

体

細胞リザーバーとコンパートメント、および軸索リザーバーとコンパートメントで構成され、マイクログルーブで接続されたプラスチック製のマイクロ流体チップを取ります。

プレコーティング溶液を追加してコンパートメントと溝を飽和させ、気泡の閉じ込めを防ぎます。

溶液を吸引し、メインコンパートメントを満たしたままにします。バッファーで洗浄します。

ニューロンの接着を促進する合成ポリマーでウェルをコーティングします。バッファーで洗浄し、チップが乾燥しないように培地を加えます。

ラット海馬ニューロンの懸濁液を播種するには、培地を吸引します。

懸濁液を体細胞リザーバーにロードします。ニューロンは体細胞コンパートメントに入り、付着します。

ニューロン培養培地をウェルに加え、インキュベートします。培地中に存在する成長因子は、ニューロンの成長を促進します。

徐々に、ニューロンは軸索を伸ばし、微小溝を通って軸索コンパートメントに成長します。

溝が狭いため、神経細胞体の侵入が妨げられ、体細胞領域と軸索領域の物理的分離が保証されます。

まず、滅菌済みのマルチコンパートメントチップをペトリ皿に入れます。チップの左上のウェルに100マイクロリットルのプレコーティング溶液を加え、メインチャネルを通って隣接するウェルに流れるようにします。次に、チップの左下ウェルに100マイクロリットルのプレコーティング溶液を入れます。

今度は、溶液がマイクログルーブを通るまで5分間待ちます。次に、100マイクロリットルのプレコーティング溶液を右上のウェルに加え、メインチャネルを通って隣接するウェルに流れ込みます。90秒後、右下のウェルに100マイクロリットルのプレコーティング溶液を入れ、チップを10分間インキュベートします。

ピペットチップをメインチャネルから慎重に離し、各ウェルから溶液を吸引します。次に、すぐに150マイクロリットルのPBSを左上のウェルに加え、1.5分待ちます。次に、150マイクロリットルのPBSを左下ウェルに加え、液体がマイクロ溝を通って流れるように5分間待ちます。

次に、150マイクロリットルのPBSを右上と右下のウェルに順番に加えます。10分後、再びPBSを吸引し、洗浄ステップをもう一度繰り返します。2回目の洗浄に続いて、ピペットチップをチャネル開口部から離して角度を付けて、前と同じようにPBSをウェルを吸引します。

次に、100マイクロリットルの0.5mg/mlのポリ-D-リジン溶液をチップの左上のウェルに加えます。1分半待ってから、左下のウェルに100マイクロリットルのポリ-D-リジン溶液を入れます。チップの右半分でこのプロセスを繰り返します。ペトリ皿を閉じ、チップを摂氏37度のインキュベーターに1時間入れます。

インキュベーション後、前述のようにチップをPBSで2回すすぎます。次