マウスアストロサイトのニューロンへのダイレクトニューロンリプログラミング

遺伝子組み換えされた星状細胞を含むマルチウェルプレートから始めます。これらの細胞は、アストロサイト培地に配置されたカバーガラスに接着されます。

これらの遺伝子組み換え細胞は、ニューロンへの移行を強制する形質転換因子を発現します。このプロセスはニューロンの再プログラミングと呼ばれます。

特定の分子とB27サプリメントを含む神経分化培地を取ります。これらの成分が一緒になって、分化に不可欠な栄養素と因子を提供します。

アストロサイト培地をニューロン分化培地に置き換えます。

アストロサイトを必要な期間インキュベートします。

インキュベーション中、アストロサイトによって発現される形質転換因子は、アストロサイトのニューロンへの変換を可能にする一連の分子イベントを引き起こします。

変換されたニューロンは、典型的なニューロンと同様に、より小さな細胞体と細長い突起を持っています。

49ミリリットルの塩基性培地に1ミリリットルのB27サプリメントを加えて、ニューロン分化培地を調製します。24〜48時間後、細胞が形質導入またはトランスフェクトされたかどうかに応じて、アストロサイト培地をウェルあたり1ミリリットルのニューロン分化培地に交換します。細胞を摂氏37度で9%の二酸化炭素で培養します。

再プログラミング効率を高めるには、アストロサイト培地を分化培地に置き換えるときに、ニューロン分化培地にフォルスコリンとドルソモルフィンをそれぞれ30マイクロモルと1マイクロモルの最終濃度まで補充します。細胞をフォルスコリンとドルソモルフィンで処理することを選択した場合は、最初の治療の2日後にドルソモルフィンの2回目の投与を提供します。この2回目の処理を培地に直接加えます。