血液由来多能性幹細胞からの神経細胞の生成

ウェルの底にガラスカバーガラスを置いたマイクロプレートを取ります。

正に帯電したポリマーを導入してカバーガラスをコーティングし、洗浄して結合していないポリマーを除去します。細胞外マトリックスタンパク質で処理してカバーガラスをコーティングし、結合していないタンパク質を吸引します。

コーティングは、細胞の接着を促進する培養基質として機能します。

ウェルに誘導培地を加え、血液由来多能性幹細胞(BD-PSC)の懸濁液を導入します。これらの細胞は、さまざまな細胞型に分化することができ、血液前駆細胞を再プログラミングすることによって生成されます。

細胞が基質に付着するまでインキュベートします。誘導培地中の成長因子と栄養素は、BD-PSCを神経前駆細胞に変換します。

ニューロン成長因子を含む分化培地を導入してインキュベートすると、神経前駆細胞のニューロン表現型への分化が引き起こされ、拡張された細胞プロセスと細胞間接触を示します。

ガラスカバーガラスを4ウェルプレートに入れ、二重蒸留水中で1〜5希釈したポリ-L-オルニチンでコーティングします。カバーガラスを摂氏37度で1時間インキュベートした後、二重蒸留水で洗浄します。

ラミニン1ミリリットルあたり0.5〜2ミリグラムをゆっくりと解凍し、カバーガラスの上部に加えます。それらを摂氏37度で2時間インキュベートし、ピペッティングによって余分なラミニンを除去し、ニューロン培地N2を培養皿に加えます。

BD由来のCD45陰性細胞を、ラミニンオルニチンでコーティングされたガラスカバーガラス上のN2培地でインキュベーターで2日間培養し、摂氏37度で5%の二酸化炭素を使用して、新たにBD生成された細胞のニューロン分化を開始します。次に、細胞を神経分化培地で培養し、プレートを摂氏37度、二酸化炭素5%のインキュベーターに16日間置きます。