磁気プラットフォーム上での磁性ナノ粒子負荷ニューロンの成長と分化

まず、培養皿内の適切な培地に神経細胞を加えます。

蛍光色素でタグ付けされた磁気コアを含む蛍光磁性ナノ粒子(MNP)を追加します。

インキュベーション中、細胞はエンドサイトーシスによってMNPを取り込み、磁化されます。

きれいな磁化されたパターン化された基質を培養皿に入れます。このガラス基板には、磁気特性を備えた幾何学的パターンが埋め込まれています。

基板を紫外線に当てて滅菌します。

基質をコラーゲンでコーティングして、細胞の付着を促進します。

MNPを充填した細胞を基質に加え、インキュベートします。

基板の外部磁場がMNPを充填したセルを引き付け、それらの付着を可能にします。

特定の成長因子を含む培地を一定の間隔で添加します。

成長因子は細胞が伸長を形成するのを助け、基質の磁気パターンはこれらの伸長の方向を指示します。

コーティングされていない通常の35ミリメートルの皿に100万個の細胞を播種します。計算された量のMNP懸濁液と分化培地を皿に加えて、目的のMNP濃度を達成します。細胞、MNP、分化培地を混合し、摂氏37度の5%二酸化炭素加湿インキュベーターで24時間インキュベー

トします。

パターン化された基質を70%エタノールで洗浄し、フード内の35mmの培養皿に入れます。パターン化された基板の下に大きな磁石を1分間置き、皿を上下に動かし、磁石をフードから取り出して取り外します。紫外線を15分間オン

にします。

コラーゲンコーティングされたガラス基板を調製するには、I型コラーゲンを30%エタノールで1対50の比率で希釈します。ガラスを溶液で覆います。すべての溶液が蒸発するまで、皿をフードに蓋をせずに4時間放置します。次に、滅菌PBSで3回洗浄します。インキュベーターから細胞を取り出します。細胞懸濁液を200gで5分間遠心分離し、上清を廃棄します。細胞を1ミリリットルの新鮮な分化培地に再懸濁し、血球計算盤を使用して細胞をカウントします。

35ミリメートルの培養皿の基質の上に10⁵個の細胞を播種し、2ミリリットルの分化培地を加えます。培養物を摂氏37度の5%二酸化炭素加湿インキュベーターでインキュベートします。24時間後、1〜100個の新鮮なマウスベータ-NGFを細胞に加えます。分化培地を更新し、2日ごとに新鮮なベータNGFを追加します。