ヒト胚性幹細胞の神経前駆細胞への分化

細胞外ポリマーと接着タンパク質を含む基底膜マトリックスでコーティングされたマルチウェルプレートから始めます。

Rhoキナーゼ阻害剤を含む増殖培地にヒト胚性幹細胞の単一細胞懸濁液をウェルに播種します。

幹

細胞をマトリックスに付着させるためにインキュベートします。

細胞は阻害剤を吸収し、Rhoキナーゼ酵素をブロックし、アポトーシス細胞死を防ぎます。

これにより、細胞の生存が促進され、未分化状態に維持されます。

成長培地を、成長因子が豊富で、特定のALK受容体を標的とする阻害剤を含む神経誘導培地に置き換えます。

これらの阻害剤は受容体と相互作用し、BMP および TGF-β シグナル伝達経路をブロックし、細胞の内胚葉または中胚葉前駆体への分化を防ぎます。

これにより、幹細胞が外胚葉前駆体に選択的に分化します。

これらの外胚葉前駆体は、培地からの栄養素と成長因子を利用して増殖し、その後神経前駆細胞に分化します。

10マイクロモルのROCK阻害剤を含む2ミリリットルのmTeSR1に、ウェルあたり2 x 10 5細胞の密度で基底膜マトリックスでコーティングされた6ウェルプレートに細胞をプレーティングします。24時間後、培地を1マイクロモルのドルソモルフィンと5マイクロモルのSB431542を添加した神経誘導培地と交換します。神経誘導の最初の4日間は1日おきに培地を交換し、その後は7日目に合流に達するまで毎日

交換します。