介在ニューロンと脳室内皮細胞との共培養の確立

細胞の接着を促進するために、細胞培養基質でコーティングされた培養皿を取ります。

この皿には、中央にベースが取り付けられていないワンウェル培養インサートが含まれており、明確なコンパートメントが作成されます。このコンパートメントの輪郭は、細胞の移動を観察するために皿にマークされています。

脳室周囲内皮細胞またはPVEC、脳の血管を覆う細胞、および脳の発達中にPVECに沿って移動する介在ニューロンを含むコンパートメントに細胞懸濁

液を導入します。

水分を維持するために共培養培地を皿に加え、細胞が基質に付着しやすくするためにインキュベートします。

インサートを取り外して物理的な障壁を除去します。培地をリフレッシュし、再度インキュベートします。

PVECは増殖し、インサート境界を超えて内皮細胞ネットワークを拡大します。

PVECは、ガイダンスキューとして機能する因子を分泌し、介在ニューロンがPVECネットワークに沿って移動するように指示します。

介在ニューロンの移動を示す共培養は、分析の準備が整いました。

共培養アッセイを実行するには、30,000個のGABA作動性介在ニューロンと30,000個のヒト脳室周囲内皮細胞を70マイクロリットルの共培養培地に懸濁します。次に、この細胞溶液をワンウェルインサートコンパートメント内に播種します。48時間後、インサートを取り外します。共培養物を摂氏37度、二酸化炭素5%で5日間インキュベートします。