器官型スライス共培養モデルにおける脳腫瘍の確立

アガロース包埋マウスの脳スライスから始めます。

脳スライスを培地を含むメンブレンインサートに置きます。

スライスを水没させて、栄養素に均一にさらされるようにします。

インサートから少量の培地を収集し、ウェルの底に移します。

インサートから余分な培地を取り除きます。

インサートを培地を含むペトリ皿に移します。

スライスからアガロースの端を慎重に取り除き、その後の相互作用にアクセスできるようにします。

インサートを培地を含む新しいウェルに入れ、スライスの回収を促進するためにインキュベートします。

ヒト脳腫瘍細胞をスライスに加え、インキュベートします。

腫瘍細胞は脳細胞およびスライス内の微小環境と相互作用し、増殖を開始し、3D 共培養モデルを確立します。

スロット付きスプーンを使用して、インサートの培地にブレインスライスを入れ、スライスを完全に水没させるようにそっと押します。すべてのスライスに対して手順を繰り返します。次に、インサートの上部から1ミリリットルのスライス培地を引き出し、ウェルの底に分注します。

脳スライスの周りのアガロースの端が見えるようになるまで、余分な培地を取り除いて廃棄し、残りのスライスに対してこれを行います。次に、鉗子でインサートの縁を持ち上げ、傾けて余分なメディアを取り除きます。

インサートを1ミリリットルのスライス培地を含む35ミリメートルの皿にすばやく移します。スライスを伸ばしたり損傷したり、膜に穴を開けたりしないように注意しながら、組織の周りのアガロースを取り除きます。続いて、インサートを6ウェルプレートに戻し、残りのスライスについて繰り返します。

ブロワーをオフにした組織培養フードで、各膜からアガロース断片を取り除きます。その後、先ほど用意した6ウェルプレートにスライスを移し、摂氏37度で24〜48時間保存します。この手順では、ブロワーをオフにした状態で組織培養フード内の新鮮なスライス培地を含む新しい6ウェルプレートにインサートを移します。次に、腫瘍細胞を65マイクロリットルの培地でスライスの中心に分注します。脳スライスを摂氏37度に1週間培養し、培地を毎日交換します。