アストロサイトとニューロンの3D共培養球を生成してシナプス形成を誘導

界面活性剤でコーティングされたマルチウェルプレートを取り、ウェルの表面張力を下げます。

適切な培地にアストロサイトとニューロンの所望の比率を加えます。

遠心分離して細胞を沈殿させ、インキュベートします。

表面張力が低いため、細胞がウェル表面に付着して凝集するのを防ぎます。

細胞は、接着分子を含むさまざまな膜相互作用を通じて互いに付着し、3D共培養球を形成します。

球体を集めてチューブに移します。

球体が落ち着くのを待ちます。上清を取り除き、新鮮な培地を加えます。

球体を適切な増殖培地を含むスピナーフラスコに移し、一定の回転でインキュベートします。

球体では、ニューロンは互いに突起を伸ばし、シナプスと呼ばれる接合部を形成し、星状細胞はシナプスに向かって伸び、ニューロンとの密接な関係を確立します。

解

離したhAstrosとhNeuronまたはiNeuronを、マイクロプレートの各ウェルに合計2ミリリットルの総容量で所望の比率で加えます。プレートを100倍gで3分間遠心分離し、インキュベーターに戻して2日間。

1日後、密に詰まったマイクロスフェアがプレート内に形成されているはずです。1,000マイクロリットルのマイクロピペットを使用して、マイクロウェルから球体をそっと取り除きます。マイクロウェルの底に培地で軽く力を加えて、付着した球体を除去します。

すべての球を15ミリリットルの円錐形のチューブに集めた後、沈殿させます。次に、最初に古い培地を吸引し、次に少なくとも2ミリリットルの新鮮な培地を加えて球体を洗浄します。50〜60ミリリットルの培地を含むスピナーフラスコに球体を加えます。フラスコをインキュベーターに置き、60 RPMに設定された磁気攪拌プレートに置きます。シナプスの形成には最低3週間の培養が必要です。