人工神経前駆細胞のアストロサイトへの分化

誘導

された神経前駆細胞(iNPC)を細胞外マトリックスタンパク質でコーティングされたマルチウェルプレート上で培養します。

培地をグリア誘導培地と交換し、インキュベートします。培地中の成長因子とホルモンは、iNPCのグリア前駆細胞への分化を促進します。

細胞増殖のために培地を一日おきに交換してください。次に、培地をアストロサイト培地に置き換えてインキュベートします。

培地中の特定の栄養素と成長因子は、グリア前駆細胞の星状細胞への分化を促進します。

一日おきに培地の変更は、星状細胞の成熟を促進します。

細胞が約70%コンフルエントになったら培地をニューロディフ培地に変更し、3週間1日おきに培地を交換し続けます。分化中に細胞を分割しないでください。3週間後、細胞はニューロンマーカーTuJ1を発現するはずです。

より成熟したニューロンとニューロンのサブタイプを得るには、最大3か月まで分化を続けます。グリア系統に特異的にiNPCを分化させるには、グリア前駆細胞への分化を誘導するために、上皮成長因子1ミリリットルあたり20ナノグラムを含むグリア誘導培地に培地を変更します。培地の半分を取り除き、約2週間、1日おきに新鮮な培地と交換します。

この期間中、100%のコンフルエントに達したら、10マイクロモルのRhoキナーゼ阻害剤の存在下で細胞を1〜3に分割する必要があります。2週間後、細胞がほぼコンフルエントになったら培地を市販のアストロサイト培地に変更し、2日ごとに培地を交換し続けることにより、細胞をさらに星状細胞に分化させます。約7日後、細胞は星状細胞マーカーの発現を開始します。