神経前駆細胞のニューロンへの分化

栄養豊富な基礎分化培地にマウス胚性幹細胞由来の神経前駆細胞を含むゼラチンコーティングされたマルチウェルプレートから始めます。

前

駆細胞は培地からのこれらの栄養素を利用して生存率を維持します。

ゼラチンでコーティングされた表面に細胞が付着できるようにインキュベートし、次に洗浄して付着していない細胞や破片を除去します。

安定化剤、追加の栄養素、および細胞分化に不可欠な神経成長因子を添加した基礎分化培地を導入し、インキュベートします。

前

駆細胞は栄養素と成長因子を消費し、細胞プロセスを拡張し始めるニューロンへの分化を開始します。

同時に、安定剤は有毒な代謝産物と相互作用し、発達中のニューロンを酸化的損傷から保護し、その生存率を維持します。

栄養レベルを維持するために培地を定期的に交換してください。

時間が経つにつれて、ニューロンは成熟し、軸索、つまりより長い細胞プロセスが発達します。

さらに、より短い細胞プロセスである樹状突起も発達させ、幹細胞のニューロンへの分化を確認します。

約500,000のマウス胚性幹細胞誘導体をウェルあたり2ミリリットルの基礎分化培地に0.1%ゼラチンコーティングプレートに播種します。誘導体をランダムに 3 つのグループに分けて、3 つの第 II 相分化プロトコルをテストします。プレートを6時間インキュベートします。次に、細胞を2ミリリットルのPBSで2回洗浄し、プロトコルに応じて、2ミリリットルの基礎分化培地、N2 B27培地1、またはN2 B27培地2を各ウェルに加えます。プレートをインキュベーターに入れ、細胞をさらに10日間分化させ、対応する培地を2日ごとに交換します。