0 閲覧数 • 3:35 分 • July 8th, 2025
ニューロンとさまざまな非ニューロン細胞を含む海馬組織サンプルから始めます。
プロテアーゼ酵素溶液を加えます。この酵素は組織の細胞外マトリックスを分解し、細胞解離を開始します。
プレーティング培地で洗浄し、残留酵素を除去します。
消化された組織を繰り返しピペットで移動させ、細胞を組織から機械的に解離させ、単一細胞懸濁液を形成します。
遠心分離して上清を除去します。細胞をプレーティング培地に再懸濁します。
マルチウェルプレート内のポリ-D-リジンでコーティングされたカバーガラスに細胞を播種します。リジンは細胞の付着を強化します。
プレーティング培地を、ニューロンの生存に必須の栄養素を含むニューロン維持培地に交換します。
培地の半分をアラビノシルシトシン(Ara-C)を含む維持培地でリフレッシュします。
Ara-Cは細胞に侵入し、非神経細胞の増殖を選択的に阻害し、非神経細胞を死滅に導きます。
ニューロンの生存をサポートするために、培地を新しい維持培地に交換します。
培養のために海馬ニューロンを解離させるには、プロテアーゼ酵素溶液を解凍し、プレーティング培地を摂氏37度に予熱します。次に、解剖した海馬をSLDSですすいでください。次に、それを取り出し、2ミリリットルのプロテアーゼ酵素溶液を加え、サンプルを摂氏37度で15分間インキュベートします。
その後、海馬外植片を5〜10ミリリットルのプレーティング培地で2回洗浄し、5ミリリットルのプレーティング培地を加えます。1ミリリットルのプラスチックチップを備えたピペットを使用して小さな渦を生成することにより、海馬外植片を単一細胞に解離します。溶液が濁り、大きな外植片が残らなくなるまで、酸素の泡の形成を避けながら、約40回上下にピペットを回します。
次に、細胞を重力の1,125倍で3分間遠心分離します。細胞を培地に浸した状態で上清を取り除き、145ミリリットルのプレーティング培地に細胞を再懸濁します。次に、ウェルあたり1ミリリットルの細胞懸濁液を24ウェルプレートに加えます。細胞をプレーティング培地中で摂氏37度で2〜4時間インキュベートします。
その後、めっき媒体を取り外し、新しいメンテナンス媒体と交換します。2日後、線維芽細胞、内皮細胞、グリア細胞の増殖を阻害するために、培地の半分を維持培地に溶解した2マイクロモルのAra-Cに置き換えます。次に、細胞をAra-Cに2日間曝露した後、培地を新鮮な維持培地と交換します。
本記事では、培養のために組織サンプルから海馬ニューロンを分散させるプロセスについて詳しく解説します。in vitro での維持および増殖に向けた細胞調製の手順について説明します。
海馬ニューロンの信頼性の高い解離および培養により、初期段階の神経科学における創薬のための標準化されたニューロン濃縮in vitroシステムの構築が可能になります。これらの培養系は、ニューロンのメカニズムを解析するための制御されたプラットフォームを提供し、ターゲットバリデーションやメカニズムのデリスキングにおける予測の信頼性を高めます。本手法によるニューロン集団への選択性は、神経生物学に特化したパイプラインにおけるトランスレーショナルな連続性とポートフォリオの意思決定を強化します。
このニューロン解離および培養プロトコルは、初期探索とアッセイ開発の接点に位置し、その後のスクリーニングやメカニズム研究のための基礎的なシステムを提供します。
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最終更新:29 8月 2026