ニューロン-オリゴデンドロサイト相互作用をモデル化するための共培養法

細胞外マトリックス上で培養されたヒト誘導ニューロン(iN)を取り上げます。

培地を取り除き、マトリックスを破壊して細胞を解離させる消化酵素を加えます。

iNをチューブに移します。懸濁液を遠心分離し、酵素を含む上清を廃棄します。

iNを共培養培地に再懸濁します。それらを誘導されたオリゴデンドロサイト前駆細胞(iOPC)の培養物に移します。

iOPCは、ニューロンの軸索の周りにミエリン鞘を形成するオリゴデンドロサイトの前駆体です。

インキュベーション時に、iOPCはiNとシナプス結合を形成します。培地中のiOPCおよび成長因子によって放出される栄養因子は、ニューロンへのiN成熟を促進し、他のニューロンとのシナプス結合を形成する細胞プロセスの増加を示します。

培地中の成熟ニューロンと成長因子の電気的活性は、iOPCのオリゴデンドロサイトへの成熟を誘導します。

オリゴデンドロサイトは細胞突起を拡張し、ニューロン軸索の周囲にミエリン鞘を形成します。

確立された共培養は分析の準備ができています。

14日目に、OPC分化培地の24ウェルプレートにウェルあたり1 x 10⁵細胞の密度でiOPCをプレートします。翌日、誘導されたヒトニューロンを細胞剥離溶液で分離します。培養したOPCにニューロンを加え、ウェルあたり2 x 10⁵細胞の座った密度でプレーティングします。神経基底A培地、2%B-27サプリメント、および100ナノグラム/ミリリットルT3トリヨードチロニンを含む共培養培地を使用します。翌日、その後は隔日で培地を交換します。OPCの増殖が速すぎて3日以内にコンフルエントに達する場合は、2〜5マイクロモルのAra-Cを追加します。