脊髄神経前駆細胞の運動ニューロンへの分化

合成ポリマーと接着タンパク質でコーティングされた培養プレートから始めます。

運動ニューロン分化培地に再懸濁した脊髄神経前駆細胞を添加し、低分子阻害剤を添加します。

コーティングされたプレート表面は、細胞の接着を促進します。

低分子阻害剤は特定のプロテインキナーゼをブロックし、細胞のアポトーシスを防ぎます。

使用済み培地を取り出し、新鮮な分化培地を加えます。

培地には、神経前駆細胞から運動ニューロン前駆細胞への分化を促進する化合物が含まれています。

さらに、グリアにコミットした前駆細胞が出現します。

次に、DNA合成阻害剤を添加した分化培地に置き換えます。

これらの阻害剤は、グリア前駆細胞のDNA損傷と死を選択的に誘導し、運動ニューロン前駆細胞は成熟ニューロンに分化します。

細胞をバッファーで洗浄し、ニューロンを維持するために阻害剤を含まない分化培地を加えます。

培養中は定期的に培地を交換して栄養素を補給してください。

さらに、培地を接着タンパク質を添加した培地に置き換えてニューロンの付着を強化し、均質な運動ニューロン培養を確立します。

神経前駆細胞培養物が凍結されている場合は、それらを解凍します。原稿に記載されているように培地交換およびPBSすすぎの後、培地を0.02マイクロモルのシトシンアラビノシドを含む運動ニューロン分化培地と交換します。

次に、細胞クラスターに凝集した有糸分裂後の運動ニューロン前駆細胞の下に、グリアにコミットした前駆細胞が単一の増殖する扁平細胞として出現するときに、摂氏37度と5%の二酸化炭素で細胞を48時間インキュベートします。後で、原稿に示されているように培地交換を行います。