マイクロ流体共培養システムを用いた歯胚芽と三叉神経節の相互作用の解析

合成ポリマーと接着タンパク質でコーティングされたマイクロ流体デバイスを考えてみましょう。

この装置は、マイクログルーブで区切られたウェルと相互接続された培養チャンバーで構成されています。

チャンバーには、組織を配置するためのパンチ穴があります。

三叉神経節、三叉神経細胞体の集合体、および成人歯に発達する出生前構造である歯胚をマウス胚から取得します。

組織を穴に入れ、それぞれの培地を追加します。

歯胚培地に含まれる栄養素とビタミンは、培養中の歯胚の生存を促進します。

コーティングされたデバイス表面と三叉神経節培地の成長因子は、神経突起と軸索の成長を促進します。

軸索は、マイクログルーブを通って歯の胚室に到達します。

歯由来の信号はニューロンの反発を引き起こし、軸索が歯胚を神経支配することなく歯の胚芽を取り囲むことを可能にします。

培養チャンバーを緩衝液で洗浄し、固定剤で組織を固定します。

共培養は、さらなる分析の準備が整いました。

三叉神経節と歯の胚芽を解剖した後、マイクロ流体デバイスからラミニンを取り除き、チャンバーを200マイクロリットルのそれぞれの培地で満たします。鉗子を使用して、解剖された三叉神経節と歯の胚芽を生検パンチで作成された穴にそっと移します。歯の細菌が浮かないようにし、カバーガラスに接触するまで

沈むようにしてください。

サンプルを摂氏37度、二酸化炭素5%のインキュベーターで培養します。培地を48時間ごとに10日間交換します。培地を交換するには、まずピペットをウェルの外側に向けて培地を取り除きます。次に、チャンバーの反対側にあるウェルの側面に新鮮な予熱培地を追加します。

培養期間中は、光学顕微鏡を使用していつでも共培養物を画像化します。培養期間の後、150マイクロリットルのPBSをチャンバーごとに1つのウェルにピペッティングし、PBSをチャンバーを流してチャンバーを洗浄します。合計3回洗濯を繰り返します。

最後の洗浄に続いて、PBSを除去し、PBS中の150マイクロリットルの4%パラホルムアルデヒドをチャンバーごとに1つのウェルにピペッティングし、他のチャンバーに流すことでサンプルを固定します。デバイスを室温で15分間インキュベートします。次に、チャンバーをPBSで2回洗浄し、免疫蛍光染色や成長物のイメージングなどのさらなる分析に進みます。