神経細胞培養のためのコラーゲン被覆コンパートメント培養皿の調製

まず、培養皿にコラーゲン溶液を加えます。

溶液の酸性pHは、コラーゲンマトリックスの形成を防ぎます。

余分な溶液を取り除きます。

水酸化アンモニウムに浸したガーゼパッドと一緒に皿をトレイに入れます。アンモニアガスを封じ込めるために蓋をします。

これらの蒸気は pH を上昇させ、酸性環境を中和します。

中和によりコラーゲン分子間の静電反発が破壊され、コラーゲン分子が安定したマトリックスを形成できるようになります。中央を横切って水平方向のスクラッチを作成します。

コン

パートメントチャンバーのベースに非反応性グリースを塗布します。

次に、皿の傷の付いた表面をチャンバーに取り付けます。

裏

返してグリースを塗布し、中央のコンパートメントを密閉します。

漏れを確認するためのメディアを追加します。漏れをグリースで塞ぎます。

これにより、神経細胞用の中央コンパートメントと腫瘍用のサイドコンパートメントの3つのコンパートメントシステムが形成されます。

神経細胞は、引っかき傷に沿ってサイドコンパートメントまで成長し、軸索にミエリン鞘を生成し、腫瘍と細胞の相互作用の研究を促進します。

区画培養皿を組み立てるには、コラーゲン原液を滅菌蒸留水で1ミリリットルあたり500マイクログラムに希釈し、完全に混合します。滅菌移送ピペットを使用して、35ミリメートルの培養皿に2ミリリットルの希釈コラーゲン溶液を入れます。次に、皿を少し傾けて溶液を取り除き、コラーゲンの薄い膜を残します。溶液を次の35ミリメートルの皿に分配します。このプロセスを繰り返し、すべての皿がコーティングされるまで、必要に応じてコラーゲン溶液を追加します。

層流フードでコラーゲンを重合するには、ガーゼパッドを3ミリリットルの濃水酸化アンモニウムで濡らし、トレイを15分間覆います。ガーゼパッドを取り外し、35ミリの皿を乾かします。次に、金属ヤスリを使用して18ゲージの針の先端をヤスリで削り、鈍い先端を作ります。針を70%エタノールに浸して滅菌します。コンパートメントチャンバーの底にシリコングリースを塗布します。グリースがきちんと配置され、すべての角が重なっていることを確認してください。

この技術は非常に難しい場合があるため、軸索の成長を確実にするために、コンパートメントチャンバーをセットアップする前に、適切な量のグリースを塗布する練習に余分な時間を取ることをお勧めします。ゆっくりと作業することも非常に重要です。必要と思われるよりも多くのチャンバーを設置して、何か問題が発生した場合に余分なものを用意します。

35ミリの皿から蓋を外します。皿を裏返し、傷をチャンバーの上に置きます。鉗子で皿の底を軽くたたきます。

グリースチャンバーを皿に塗布するときは、強く叩きすぎないでください。そうしないと、軸索が隣接するチャンバーの下に成長でき