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神経幹細胞培養における汚染を最小限に抑えるには、層流フード、バッファーチャンバー、プロセスチャンバー、顕微鏡チャンバーを備えた施設を使用し、それぞれが気密ドアで区切られています。
次に、湿度を維持するためにインキュベーターの培養プレートに水を入れます。
バッファーチャンバー、プロセスチャンバー、およびインキュベーターのパラメータを最適なレベルに調整します。
消毒剤と滅菌ガーゼですべての表面を洗浄し、微生物汚染物質を除去します。
神経幹細胞培養プレートを、ろ過された空気を提供する層流フードに最初に置きます。
プレートの外側をエタノールに浸したガーゼで拭き、ろ過された空気を最適なガスレベルで供給するバッファーチャンバーに移します。
最後に、プレートをプロセスチャンバーを通してインキュベーターに移動し、ドアを閉めます。
インキュベーション後、培養プレートを新鮮な培地とともにプロセスチャンバーに戻します。
新鮮な培地を平衡化します。
培養プレート内の培地をリフレッシュし、プレートを再インキュベートします。
各インキュベーターの底にある水鍋に3つのペトリ皿を置きます。これらの皿に滅菌水を入れ、インキュベーター内の相対湿度設定値を維持するために重要であるため、これらの皿の水位を維持します。
グラフィカルインターフェイス内で、インキュベーターをクリックします。次に、設定値下の相対湿度の既存の値をクリックし、85%と入力します。次に、緑色のチェックマークをクリックして、この値を受け入れます。
次に、バッファーチャンバー、プロセスチャンバー、およびインキュベーターを、導入するセルの種類に必要なガス設定値に調整します。プロセスチャンバーの表面は、滅菌ガーゼと、塩化ベンザルコニウムベースの製品などの不燃性消毒剤で洗浄します。
次に、手袋やドアハンドルなど、よく触れる表面を掃除します。続いて、層流フードとバッファーチャンバーの表面を70%エタノールで洗浄し、乾燥させます。
その後、細胞のフラスコまたはプレートをフードに入れ、エタノールで飽和させた滅菌ガーゼスポンジでその外面を短く拭きます。次に、フラスコまたはプレートをバッファーチャンバーに入れ、希釈係数を実行します。完了したら、すぐにフラスコまたはプレートを適切なインキュベーターに移します。
インキュベーターはプロセスチャンバーの後ろにあるため、セルを配置するために棚をプロセスチャンバーに引き出し、インキュベーターのドアを不必要に開いたり、長時間開けたりしないでください。
このステップでは、細胞培養培地を調製します。培地容器のキャップをわずかに外して 20 分間放置し、培地をシステム内に存在する二酸化炭素および酸素レベルと平衡させます。
その後、古い培地をウェルから取り除きます。多能性幹細胞の場合、給餌プロセス中の乾燥を防ぐために、古い培地を少量残して古い培地をほとんどすべて除去します。神経幹細胞の場合は、古い培地の半分を取り除きます。次に、細胞培養プレートに新鮮な培地を加え、プレートを指定されたインキュベーターに戻します。