ヒト神経幹細胞からの皮質錐体ニューロンの生成

培養プレートで、カバーガラスを正電荷を帯びたポリマーであるポリオルニチンでコーティングし、インキュベートします。

ポリオルニチンはメッシュ状の層を形成し、負に帯電した細胞がカバーガラスに付着するのを助けます。

溶液を取り除き、カバーガラスを緩衝塩溶液で洗浄して、結合していないポリオルニチンを除去します。

ラミニンと呼ばれる細胞外マトリックスタンパク質を含む溶液を加え、インキュベートします。

ラミニンは、ポリオルニチンでコーティングされたカバーガラスの上にマトリックスを形成し、細胞の付着を強化します。

溶液を廃棄し、成長因子を含まない培地に懸濁した少数の神経幹細胞を取ります。

この低密度培養物を、準備したカバーガラスの上にゆっくりと回転させて、細胞を均一に分散させます。

最初は、成長因子の欠乏により細胞分裂が促進されます。

時間が経つにつれて、幹細胞は長い突起を持つニューロンに分化します

最終的に、ニューロンは、皮質錐体ニューロンのように、突起の上に背骨のような構造を生成します。

神経細胞培養物を調製するには、ガラスカバーガラスを6ウェル培養皿に入れ、ポリオルニチンを加えます。フローフードの下で一晩インキュベートします。翌日、DPBSを使用してカバーガラスを3回洗浄し、ラミニンを追加します。フローフードの下で少なくとも10時間インキュベートします。

以下の成分を含む培地を調製します。次に、培地を使用して、神経幹細胞またはNSCを1平方センチメートルあたり50,000細胞の密度でプレーティングおよびディスパッチし、細胞のクラスタリングを減らすためにゆっくりとした回転運動でピペッティングします。