マウスの子犬の脳からの視床皮質スライスの調製

ネズミの子犬の脳をスライドの上に背側を上に向けて置きます。

脳の前面をトリミングし、作成された平らな面に再配置します。

スライド上で脳の背側表面と正中線を揃えます。接続された聴覚中脳と前脳の構造を揃えるように斜めにカットします。これらの構造は、下丘またはIC、内側膝状体またはMGB、視床網状核またはTRN、および聴覚皮質またはACです。

角度を付けて切断した脳表面を寒天ブロックでビブラトーム標本ステージに取り付け、後脳がより薄いブロックに支えられるようにします。

ステージをビブラトームに移し、組織の損傷を防ぐためにバッファーを追加します。

ライスを開始して、IC、MGB、TRN、および AC を見つけます。

コリキュロ視床皮質スライスと呼ばれる接続領域を含むスライスを回収し、組織の生存率を維持するためにスライスを保持チャンバーに移します。

ライス用の切断段階を準備するには、脳のバックストップとして使用する約1立方センチメートルの3%寒天の小片を切断し、下丘を支えるための隆起として使用する1.5センチメートル×1.5ミリメートル×3ミリメートルの別の寒天培地を切断します。

次に、バックストップをシアノアクリレート接着剤でステージに接着し、バックストップの右側にあるバンプを80度の角度になるように接着します。左上から右下にかけて90度の2本の線と17度の斜めの線でマークされたスライドで、2本の線の交点に脳の背側を上にして配置します。

カミソリの刃を使用して、脳の吻側端の2〜4ミリメートルを取り除き、平らな面を作成します。次に、新しく作成した平らな面に脳の尾側を上に置きます。脳の背側を水平線に合わせ、脳の正中線をスライドにマークされた垂直線に合わせます。次に、カミソリの刃を 17 度の線に合わせます。カミソリを30度の角度で傾け、右皮質の約3ミリメートルを二重斜めにカットして取り除きます。

ビブラトームステージに脳を取り付けるには、長い寸法が正中線に対して垂直になるように、脳の腹側に小さなろ紙を置きます。少量のシアノアクリレート接着剤をバックストップの前とバンプの左側に慎重に塗布します。続いて、二重斜めにカットされた脳側を接着剤の上に置き、脳の尾側と後脳が隆起に支えられ、脳の右側がバックストップに当たるようにします。

この手順では、切断ステージをビブラトームにすばやく配置します。ステージに切断液を入れます。次に、ブレードを脳の上部に合わせます。脳の上部から1〜1.5ミリメートルを取り除きます。次に、さらに深く移動しながら、300〜500マイクロメートルのスライスをさらにスライスして取り除きます。

下丘、内側膝状体、および外側膝状核がすべて見える場合、歯状回はC字型として表示され、構造は整列している必要があります。600マイクロメートルのスライスを約2枚取得します。これらは丘視床皮質スライスです。その後、摂氏32度の保持室に移します。