マウス海馬組織からの単一細胞懸濁液の取得

0 閲覧数3:42 • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

灌流した成体マウス海馬の断片を、パパインとDNaseを含む解離チューブに入れます。

チューブを機械式解離器の上に置きます。

解離剤は組織を機械的に崩壊させ、ニューロンやグリア細胞などの細胞を緩めます。

パパインは組織の細胞外マトリックスを分解し、細胞を放出します。DNaseは汚染DNAを分解します。

BSAを含むバッファーを加え、酵素を不活性化します。

懸濁液をストレーナーに通して、大きな破片を取り除きます。

濾液を遠心分離します。酵素が豊富な上清を廃棄します。

細胞をバッファーに再懸濁し、新しいチューブに移します。

密度勾配培地を加え、混合し、混合物をバッファーで重ねます。

遠心分離中、細胞と破片は密度に基づいて別々の層を形成します。

最上部のバッファ層と中央の破片層を削除します。

細胞を含む最下層にバッファーを加えて混合します。密度勾配媒体を含む上清を遠心分離して廃棄します。

海馬細胞をバッファーに再懸濁して、さらに分析します。

鉗子を使用して、海馬組織片をCチューブに移し、30マイクロリットルの酵素ミックス2をチューブに加えます。キャップをひねってカチッと音がするまで締めた後、チューブを解離器に入れ、適切なプログラムを実行します。プログラムの実行中に、50ミリリットルの円錐形チューブ上に置かれた70ミクロンのセルストレーナーを2ミリリットルのBSAバッファーで予湿します。

解離プログラムが完了したら、解離した組織に4ミリリットルのBSAバッファーを加え、50ミリリットルのコニカルチューブのセルストレーナーを通して混合物をろ過します。次に、10ミリリットルのDPBSをCチューブに加えます。次に、チューブを閉じ、溶液を穏やかに回転させ、50ミリリットルの円錐形チューブのセルストレーナーを通してろ過します。ろ過した細胞懸濁液を遠心分離します。ペレットを乱さずに上清を廃棄し、ペレットを保管します。

破片を除去するには、ペレットを1,550マイクロリットルの冷たいDPBSで再懸濁し、懸濁液をラベル付きの15ミリリットルの円錐形チューブに移します。次に、450マイクロリットルの冷たい破片除去液を加え、上下にピペットで移動します。細胞懸濁液に1ミリリットルの冷たいDPBSをそっと重ね、先端を円錐形のチューブの壁に当てます。合計オーバーレイが2ミリリットルになるまで手順を繰り返します。

次に、懸濁液を3,000倍gで10分間遠心分離し、フル加速とフルブレーキをかけます。最上層を吸引します。次に、ピペットチップを前後にスイープして、白い中間層を吸引します。最下層を乱さずに、中間層をできるだけ取り除きます。次に、2ミリリットルの冷たいDPBSを加え、ピペットを上下に混ぜます。次に、懸濁液を1,000回gで10分間遠心分離し、フル加速とフルブレーキをかけます。遠心分離後、上清を廃棄し、ペレットを1ミリリットルのBSAバッファーに再懸濁します。

07:49

新生児マウスからの脊髄ニューロンの単離と培養

関連動画

0 再生回数

06:56

12.5日目および8週齢マウスの舌上皮・間分性/結合組織からの細胞解離

関連動画

0 再生回数

04:26

胚性海馬ニューロンの凍結ストックを用いた容易で再現性の高い低密度初代培養

関連動画

0 再生回数

11:17

マウス神経組織から単細胞懸濁液の生成

関連動画

0 再生回数

10:27

胎児マウスから海馬ニューロンの単離および培養

関連動画

0 再生回数

03:35

海馬組織サンプルからのニューロンの解離と培養

関連動画

0 再生回数

03:51

マウス脳組織からの免疫細胞の単一細胞懸濁液の調製

関連動画

0 再生回数

05:00

ラット海馬から種々の神経細胞集団を得る

関連動画

0 再生回数

03:55

凍結ラット脳組織からの単一細胞懸濁液の取得

関連動画

0 再生回数

09:49

ディープシングルセルRNAシーケンシングのための1つの成人マウス脳半球からの領域特異的ミクログリアの分離

関連動画

0 再生回数

最終更新:22 8月 2026