培養ショウジョウバエ脳外植片における神経幹細胞の再活性化の解析

ショウジョウバエの脳神経幹細胞(NSC)は、外部刺激に反応して、細胞周期停止状態である静止状態を終了し、再活性化して増殖を開始します。

孵

化したばかりのショウジョウバエの幼虫を例にとると、NSCが生体内で自然に静止状態を終了する段階です。

口のフックと体をつかんで幼虫を分割します。

マウスフックの後ろにある脳を見つけて

切除します。

脳を培地を含む培養プレートウェルに移します。

処理されたウェルでは、培地にはテストホルモンが含まれていますが、対照ウェルにはホルモンが不足しています。インキュベート。

制御条件下では、NSCは外部刺激がないため静止したままです。

処理されたウェルでは、ホルモンは特定のNSC受容体に結合し、下流のシグナル伝達経路を活性化し、NSCを再活性化します。

再活性化されたNSCは細胞周期に入り、増殖します。

インキュベーション後、脳はNSC増殖を視覚化するための下流分析の準備が整い、ホルモンの再活性化の可能性を確認します。

SSMで2番目のガラス時計皿に入れられた幼虫から脳を解剖し、解剖顕微鏡下で鉗子を使用し、必要に応じて倍率を調整します。一方の鉗子で口のフックをつかみ、もう一方の鉗子で体を半分までそっとつかみ、反対方向に引っ張って幼虫を2つに分けます。15〜20個の脳を解剖した後、1ミリリットルのSSMを滅菌24ウェル培養トレイの1つのウェルに加えます。マイクロピペットと滅菌チップを使用して、解剖したばかりの脳をSSMに移し、続いて培地を脳と一緒に摂氏25度で24時間インキュベートします。