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マウスの子犬から、未熟なオリゴデンドロサイトと初代神経細胞を含む神経細胞懸濁液を採取します。
細胞の凝集を避けるために、細胞を磁気細胞選別バッファーに再懸
濁します。表面に抗O4抗体を運ぶ人工磁気マイクロビーズを追加します。溶液を撹拌して均一に混合します。
インキュベートして、マイクロビーズがオリゴデンドロサイト上のO4抗原である硫酸化ガラクト脂質と結合できるようにしますが、他の細胞は結合していないか、緩く結合したままです。
追加のセルソーティングバッファーでミックスを洗浄します。
遠心分離して上清を廃棄し、細胞を再懸濁します。
次に、ビーズ結合した細胞を、大きな細胞の塊を除去するフィルターを備えた磁気分離カラムに通します。
走行中、磁場の下で、ビーズ結合複合体は磁石に向かって移動し、側面に付着します。
結合していない細胞と緩く結合した細胞を取り除くために洗浄します。
セパレーターからカラムを取り出し、増殖培地で洗浄して、将来のアプリケーションのために初代オリゴデンドロサイトを収集します。
カウント後、細胞を再度遠心分離し、1 x 107細胞あたり90マイクロリットルの新鮮な磁気細胞選別バッファーにペレットを再懸濁します。次に、1 x 107細胞あたり10マイクロリットルの抗O4ビーズを加え、細胞溶液を穏やかにフリックしながら混合します。摂氏4度で15分間後、5分ごとに、1 x 107細胞あたり2ミリリットルの磁気細胞選別バッファーをそっと加えて遠心分離による洗浄を行い、慎重な真空吸引によって上清を廃棄します。
ペレットを1 x 107細胞ごとに500マイクロリットルの新鮮な磁気細胞選別バッファーに再懸濁し、適切なサイズの磁気ビーズ選別カラムを対応する磁気分離器に入れます。40ミクロンのストレーナーをカラムに置き、3ミリリットルの磁気セルソーティングバッファーでストレーナーを事前にすすぎ、カラムを乾燥させることなくバッファーをカラム内を流します。細胞をストレーナーに加え、磁気セルソーティングバッファーで1ミリリットル洗浄します。
洗浄ごとに3ミリリットルの磁気細胞選別バッファーでカラムを3回洗浄し、オリゴデンドロサイト増殖培地で1回洗浄します。次に、カラムを15ミリリットルのチューブに移し、プランジャーを使用して、5ミリリットルの新鮮なオリゴデンドロサイト増殖培地をカラムを通してすぐに洗い流します。