マウス脳からの傾斜扁桃体スライスの生成

氷のように冷たいバッファーに浸したマウスの脳を取ります。

小脳を切除し、内側前頭前野(mPFC)を含む前部をトリミングします。

ビブラトーム標本ステージに接着された角度の付いた寒天ブロックに組織を取り付けます。

スライス中の安定性を確保するために、追加の寒天ブロックを取り付けます。酸素化された氷冷バッファーで満たされたビブラトーム切断チャンバー内にステージを置きます。

扁

桃体にシナプス接続を形成し、その活動を調節するmPFCからの恐怖刺激とニューロン投射に反応する扁桃体を含む傾斜したスライスを生成します。

傾斜したスライスは突起を露出させ、mPFC と扁桃体の間の機能的接続の研究を可能にします。

スライスを半分に切り、酸素を含んだ人工脳脊髄液を含むチャンバーに室温で置いて組織を安定させます。

スライスを生理学的温度でインキュベートして、下流のアッセイのために組織を回収します。

メスを使って小脳を切り取ります。次に、内側前頭前野を含む脳の前部を分離します。冷却ユニットを使用して、摂氏4度に保たれた氷冷の切断液を切断チャンバーに充填します。溶液に酸素を供給します。

ろ紙で脳を吸い取って乾かします。振動ステージに対して35度の角度で切断した4%寒天ブロックを接着し、このブロックに脳組織の後部を接着します。スライス中の安定性を高めるために、脳ブロックの前後にさらに 2 つの寒天ブロックを接着します。

ティッシュを取り付けたステージを切断チャンバーに置き、水没していることを確認します。鋭いスライスをカットし始めます。各スライスを半分に切り、室温で酸素化されたACSFが供給される界面チャンバーに移します。急性扁桃体スライスを切断した後、界面チャンバーを摂氏36度のウォーターバスに入れ、スライスを35〜45分間回復させます。