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発育の適切な段階で受精鶏の卵を取ります。
胚にアクセスするために殻を切ります。
ヘッドを見つけて解剖し、冷やしたリン酸塩緩衝液を含むペトリ皿に移します。
目と顎を取り除きます。
頭蓋骨の表面から皮膚を分離します。
次に、頭蓋骨を切って取り除きます。
周囲の結合組織を取り除いて脳を露出させます。
前脳を分離します。
次に、小脳を後脳と血管から切り離します。
小脳を冷やした塩緩衝液に移します。
胚性小脳には、急速に分裂する神経前駆細胞の層が含まれているため、神経新生の研究に役立ちます。
小脳をティッシュチョッパーのプラットフォームに置きます。
余分なバッファーを取り除き、小脳をスライスします。
スライスに冷やした塩バッファーを入れます。
小脳スライスを冷やした塩緩衝液を含むペトリ皿に移します。
顕微鏡下で、さらに分析するために個々のスライスを分離します。
まず、受精した茶色の鶏卵を摂氏38度の卵インキュベーターに入れて、胚14日目に達するまで入れます。胚14日目に、卵に開口部を開けて胚を露出させ、卵形でニワトリ胚の首を切り落とします。氷冷PBSの入ったペトリ皿に頭を入れます。
解剖顕微鏡下で、標準的な鉗子を使用して、各目の後ろ、組織全体を切開し、目と上顎を切除します。次に、咽頭全体を2回目の切開して下顎を切除します。次に、標準的な鉗子を使用して、頭蓋骨の表面から皮膚を剥がして取り除きます。次に、前頭骨と頭頂骨を取り除き、脳を露出させます。
腹側から、咽頭軟骨と補助間葉を除去します。次に、脳を背側を上にして置き、軟膜を損傷しないように注意しながら、後脳の背側の間葉を慎重に取り除きます。次に、中脳と後脳の間の組織を最後まで切開し、小脳を含む後脳を切り離します。小脳の外側接合部と後脳の鼻翼板の両方の組織全体を切開します。小脳全体を切除し、解剖全体を通して軟膜の完全性を維持するように注意します。
最後に、形成中の脈絡叢を取り除き、解剖した小脳を氷のように冷たいHBSSに移動します。へらまたは3ミリリットルのパスツールピペットを使用して、小脳全体を組織チョッパーの滅菌プラットフォームに移し、先端を切り取って開口部を広げます。ピペットを使用して余分な液体を取り除きます。
ティッシュチョッパーの切断速度を最大値の50%に設定します。次に、小脳を300マイクロメートルの厚さで必要な方向に切断します。3ミリリットルのパスツールピペットを使用して、スライスした小脳を冷たいHBSSで覆います。
次に、先端をカットした3ミリリットルのパスツールピペットを使用して、HBSSとスライスを20ミリリットルの氷冷HBSSを含む60ミリメートルのペトリ皿に移します。ペトリ皿を光ファイバー光源で照らした解剖顕微鏡下に置きます。次に、時計職人の鉗子を使用して、脳組織の個々のスライスを分離します。
