ラットの子犬の脳からの鼻皮質-海馬スライスの準備

採取したばかりのラットの子犬の脳を、背側を上にして、冷やしたバッファーを入れた培養プレートに入れます。

脳半球を開き、海馬を覆っている組織を取り除きます。

海

馬と鼻皮質を含むように半球を切開します。

海馬を上に向けて平行に両方の半球をろ紙の上に置きます。

このアセンブリを、ブレードが半球に対して垂直なティッシュチョッパーに移します。

半球を必要な厚さに切断してスライスを取得し、冷却した緩衝液を入れた培養プレートに移します。

スライスを慎重に分離し、構造的に無傷の海馬皮質と鼻皮質領域を含めるように解剖します。

スライスを培地を含むマルチウェルプレート内の膜状インサートに移します。

スライスから余分なバッファーを取り除き、組織回収のためにインキュベートします。

メディアをリフレッシュします。スライスは、さらなる分析に使用できます。

脳を背側を上にして、5ミリリットルの冷たいGBSSを含む60ミリメートルのプレートに移します。細い鉗子を小脳に挿入し、正中線に沿ってヘラを挿入して慎重に半球を開きます。短く湾曲した鉗子を使用して、海馬構造に触れずに海馬を覆う余分な組織を慎重に取り除きます。次に、各海馬の下を切ります。

一度に

1つの半球を、海馬側を上にして互いに平行に、ろ紙に移します。半球をブレードに対して垂直にしてろ紙をティッシュチョッパーに置き、半球を350ミクロンのスライスにカットします。スライスした組織を5ミリリットルの冷たいGBSSを含む新しいペトリ皿に移し、丸い先端の電極を使用してスライスを慎重に分離します。

構造的に無傷の鼻皮質と海馬を持つサンプルのみを保持し、へらと丸い先端電極を使用して、ウェルあたり1.1ミリリットルの培地を含む6ウェルプレートの適切な数のウェル内の個々のインサートに最大4つの無傷のスライスを配置します。

P20ピペットを使用して、各スライスの周囲から余分な解剖培地を取り除きます。プレートを細胞培養インキュベーターに入れます。培地は2〜3日ごとに交換してください。鉗子を使用してインサートを持ち上げます。対応するウェルから培地を吸引し、インサートを元の位置に戻します。P1000ピペットを使用して、1ミリリットルの新鮮な摂氏37度培地を各ウェルに加えます。