ショウジョウバエ幼虫の脳外植片の解剖と取り付け

ウジョウバエの幼虫であるショウジョウバエを皿内の生理食塩水溶液に入れることから始めます。この溶液は幼虫の脱水を防ぎます。

解剖顕微鏡下で、口のフックで幼虫の前端を見つけます。

前端には、眼の円盤と、脳葉と腹側神経索で構成される中枢神経系(CNS)が含まれています。

鉗子を使用して幼虫の後端を保持します。別の鉗子で、前端を引っ張って内臓を抽出します。

腸と付着した筋肉を取り除き、眼の円盤に付着した中枢神経系を分離します。

脳外植片を取り付けるには、抽出した組織をスライドガラス上のグリースバリア内に封入された生理食塩水に移します。

外植片の背側が上を向いていることを確認し、カバーガラスで組織を密閉します。脳外植片は分析の準備ができています。

ショウジョウバエの幼虫から脳を採取するには、解剖顕微鏡下で、1対の5番標準先端解剖鉗子を使用して幼虫標本を所定の位置に保持し、もう1対を使用して脳を注意深く解剖し、眼の円盤、脳葉、および腹側神経索を保存します。次に、付着した筋肉を取り除き、イメージング中のサンプルの動きを最小限に抑えます。すべての脳が採取されたら、真空グリースを使用してスライドガラスに正方形のチャンバーを引き出し、チャンバーに20マイクロリットルの外部生理食塩水を加えます。

鉗子を使用して脳をチャンバーに移し、顕微鏡下で背側を上に向けて脳の位置を調整します。チャンバーをガラスカバーガラスで覆い、カバーガラスを軽く押して、イメージング手順中のサンプルのドリフトを減らします。