脳スライスにおけるドーパミン作動性ニューロンの樹状突起からのパッチクランプ記録

さまざまな

イオンを含む人工脳脊髄液または aCSF に固定化された脳スライスを沈めた電気生理学的セットアップから始めます。

セットアップには、記録電極とアンプに接続されたカリウムが豊富な溶液で満たされたパッチピペットが含まれます。

ピペットの目詰まりを防ぐために、ピペットに陽圧を加えます。次に、ドーパミン作動性ニューロンの信号受信延長である樹状突起の近くに配置します。

結果として生じる膜のくぼみは、樹状突起への近接を確認します。

陽圧を解放して吸引を生み出し、ピペットと樹状突起膜の間にしっかりとしたシールを形成します。

初期イオンの動きをベースライン電圧での作用電流として記録します。

ナ

トリウムおよびカルシウムチャネルブロッカーを含むフローインaCSFは、それぞれのチャネルをブロックし、それらを通るイオンの移動を防ぎます。

負の電圧を印加して、電圧依存性カチオンチャネルを開きます。

このチャネルにより、カリウムイオンがニューロンに入ることができ、作用電流が増加し、ドーパミン作動性ニューロンの樹状突起の刺激が示

唆されます。

この手順では、脳スライスを記録チャンバーに移します。スライスを記録チャンバーの底にプラチナリングで固定し、スライスが滑らかで均一な表面で高品質であることを確認します。次に、樹状突起が同じ平面内で長距離にわたって伸びているニューロンを選択し、目的の樹状突起を明確に定義された体細胞まで追跡できることを確認します。次に、パッチピペットに電極溶液を入れます。

細胞付着モードで樹状突起にパッチを当てるには、樹状突起の一部を特定して焦点を合わせます。ピペットに正圧を加え、マイクロマニピュレーターを使用してピペットを下げます。次に、ピペットをメンブレンの近くに置き、圧力を調整して小さなくぼみを作ります。その後、ピペットチップの圧力を解放し、ピペットの抵抗を制御しながらデンドライトにパッチを当てます。1ギガオームを超えるシール抵抗、セルに取り付けられた記録の場合はせいぜい3〜10ギガオームのシール抵抗を得るようにしてください。

その後、樹状突起の変形を避けるために、ピペットをメンブレンから数マイクロメートル引き込みます。ここで見られる活動電流は、黒色ニューロンの自発的な活動電位を表しています。作用電流を抑制するには、カルシウムおよびナトリウムチャネル遮断薬をACSFに適用します。次に、0ミリボルトの保持電位から負90ミリボルトの電圧ステップを印加して、過分極活性化陽イオン電流を誘発します。