多電極アレイを用いた初代マウス渦巻神経節ニューロンの神経活動の解析

多電極アレイ(MEA)上のらせん神経節ニューロン培養から始めます。

MEAは、回路を介して接点に接続された電極を記録することで構成されています。

MEAを洗浄してメディアを取り除き、接点を乾燥させて、録音中の湿気によるノイズを避けます。

MEAをホルダーに取り付け、録画セットアップに取り付けます。

MEA接点は、電気信号を記録セットアップに送信するホルダーコネクタと位置合わせします。

細胞外環境を模倣する溶液を追加し、ニューロンの正常な生理学的活動を可能にします。

録音を開始します。電極は、ニューロンによって生成された自発的な信号または活動電位を検出し、ソフトウェアインターフェイス上でスパイクとして視覚化します。

次に、自発的な活動を示す1つの電極に電気パルスを印加します。

パルスは電場を生成し、隣接する電極のニューロンを刺激します。

刺激依存の活動を記録します。

最後に、電位依存性イオンチャネルを遮断し、活動電位の生成を防ぐ神経毒を追加します。

信号を録音してバックグラウンドノイズを特定します。

合計

18日間の培養後、室温で以前に調製した細胞外溶液でMEA培養物を洗浄します。次に、MEAチップの接点をティッシュで乾燥させ、MEAホルダーに取り付けます。最後に、録画セットアップにMEAをインストールします。

その後

、300マイクロリットルの細胞外溶液を加え、システムが安定するまで10分間待ってから記録します。次に、すべての電極からの2分間の自発的な活動を記録し、アクティブな電極を特定します。次に、刺激に反応する電極を特定します。

刺激アーティファクトを除外するには、同じ電極から10回刺激します。培養物が10回中少なくとも8回反応する場合、電極誘発刺激に対する陽性反応と想定できます。バックグラウンドノイズを特定するには、TTXを1マイクロモルの濃度で培養物に適用して電位依存性ナトリウムチャネルをブロックし、2分間記録します。