JoVE 実験百科事典
神経科学
0 回視聴 • 3:21 分 • July 8th, 2025
まず、生理食塩水を浸したスポンジを、処置のために準備したラットの胸椎 12 椎骨に置きます。
脊髄全体に直流を流す経脊髄直流刺激またはtsDCSのために電極をその上に配置します。
tsDCS中に標的運動ニューロンの細胞内記録を測定するには、脊髄の起源の位置に微小電極を挿入します。
運動ニューロンのベースライン膜電位と電気インパルスの周波数を評価して、tsDCS 中の正確な測定のために微小電極がしっかりと配置されていることを確認します。
陽極から組織を通って電流が流れるときに正に帯電したイオンがニューロンに入る陽極tsDCSを適用します。
電流が逆方向に流れると、負に帯電したイオンがニューロンに入る陰極tsDCSを適用します。
陽極および陰極のtsDCS中の運動ニューロンの電気的特性の変化を記録します。
経脊髄直流刺激電極を配置するには、TH-12椎骨の背側に生理食塩水を浸したスポンジを置き、微細な操作を使用して、アクティブな経脊髄直流刺激電極でスポンジを押します。次に、カスタムプルされた微小電極をマイクロマニピュレーターに取り付け、1〜2ミクロンのステッピング動作と定位固定校正を可能にし、マイクロピペットチップをPRの選択されたパッチに15〜20度の内側外側の角度で打ち込みます。
運動ニューロン膜と発火特性を記録するには、細胞内増幅器のブリッジモードで、それぞれの神経枝を刺激して、アンチドロミック活動電位のオールオアナッシングの外観に基づいて運動ニューロンを識別します。
電流スイッチレートモードが4〜8キロヘルツの細胞内増幅器の不連続電流クランプモードでは、0.5ミリ秒の細胞内脱分極電流パルスを使用して、運動ニューロンに正交活動電位を誘発します。
セル入力抵抗を計算するには、1ナノアンペア電流を過分極させる40ミリ秒の短い100ミリ秒パルスで運動ニューロンを刺激します。単一のスパイクを誘発するために必要な脱分極電流の最小振幅としてレオベース値を決定するには、振幅を増加させて50ミリ秒の方形波パルスで運動ニューロンを刺激します。
次に、0.122ナノアンペアステップで増大する振幅で脱分極電流の500ミリ秒方形波パルスを注入し、運動ニューロンのリズミカルな放電を誘発します。経脊髄直流刺激の場合は、運動ニューロンの安定した浸透を維持しながら、直流を経脊髄に適用して分極手順を開始します。