ラット脳における電気生理学的記録による薬物マイクロインジェクション

電極を含む注入システムであるインジェクトロードから始めます。これは、ガラスマイクロピペット内に挿入されたマイクロニードルと銀線電極を特徴としています。

脳内での薬物の拡散の追跡を容易にするために、染料を含む試験薬溶液をインジェストロードに充填します。

鉱物油を充填した注射器をインジェストロードに取り付けます。余分な液体を拭き取ります。

このインジェクトロードを定位固定装置に固定し、マイクロポンプシステムに接続します。

頭

蓋骨に手術穴がある麻酔ラットの標的脳領域にインジェストロードを配置します。

インジェクトロードを徐々に下げて、ターゲット領域を貫通します。

最適なインジェクトロードの配置を確認する特定の電気信号を受信したら、挿入を停止します。

組織の乾燥を防ぐために、露出した頭蓋骨を温かい寒天で覆います。

脳組織を安定させます。

所望の用量の薬を注射します。

電気信号を記録して、投与された薬物に反応するニューロン活動を監視します。

最初に5〜10マイクロリットルのシリンジに鉱物油を充填して、インジェストロードを準備します。次に、生理食塩水中の染料で目的の薬物を調製します。ここでは、0.5% のシカゴ スカイ ブルーと 300 マイクロモルの GABA が混合されています。次に、最初に1ミリリットルのシリンジに調製した溶液をロードし、次にシリンジを使用してピペットをロードして、注射ピペットを充填します。

シリンジを取り外すときは、真空によってインジェクトロードから溶液が除去されないように、プランジャーに軽い圧力をかけてください。漏れの可能性があるポイントで液体が漏れていないか確認してください。余分な液体を拭き取り、漏れがないか再確認します。次に、鉱物油入りのマイクロシリンジをインジェストロードに取り付けます。次に、余分な溶液をガーゼで拭き取ります。

インジェクションチップを確認してください。それを通して溶液の小さな滴を流すことが可能であるはずです。そうしないと、詰まっているか漏れています。次に、インジェクタードをマイクロポンプシステムにしっかりと取り付けます。次に、インジェクトロードの位置をターゲット座標に移動し、電極を上丘まで下げます。

電極を下げている間は、目詰まりを避けるために、低い注入速度を適用して小さな正圧を加えます。構造体に達したら射出を中断します。インジェストロードを挿入した後、乾燥を防ぐために露出した皮質を温かい寒天で覆います。電極の最終配置後、電極の周囲の組織が安定するまで30分間待ちます。次に、上丘のニューロン活動が不活性化するまで、毎分40ナノリットルの速度で400〜800ナノリットルの溶液を注入します。

電極は、阻害溶液の注入中にスパイクの減少を示すはずです。